心阳虚证能量、脂类代谢差异表达基因谱研究

论文摘要

目的 研究冠心病心阳虚证差异表达基因谱，重点探讨脂类代谢、能量代谢、胶原蛋白差异表达基因，及其临床意义。 方法 ① 在前期虚寒证研究基础上，结合文献研究和临床调查，制定心阳虚证诊断标准。 ② 严格筛选符合冠心病心阳虚证中西医诊断标准的病例，经桂枝甘草汤合保元汤加减治疗30日，对比治疗前后的证候评分、血脂、血流变学、植物神经系数等指标的变化，分析其病史、家族史在病证诊断中的意义。 ③ 利用基因芯片技术研究冠心病心阳虚证差异表达基因谱，心阳虚证以药测证差异表达基因谱，采用共同差异表达基因筛选、基因功能分类、聚类分析、分子通路分析等方法探讨心阳虚证差异表达基因谱的临床意义。 结果 ① 制定心阳虚证25辨证因子量化诊断标准，通过信度、效度检验。 ② 筛选冠心病心阳虚证24例，治疗前后主症分、证候分有显著改善。治疗前后总胆固醇、载脂蛋白-A1、载脂蛋白-B、植物神经系数的变化达到统计学差异。 ③ 获得冠心病心阳虚证差异表达基因44条（Ratio＜0.5或Ratio＞2），心阳虚证以药测证差异表达基因22条（Ratio＜0.67或Ratio＞1.5），主要涉及脂类、免疫、胶原蛋白基因，其中冠心病相关基因（OMIM检索）13条，胶原蛋白相关基因10条。 ④ 基因分类发现心阳虚证差异表达基因主要涉及细胞器成分中，酶蛋白参与的新陈代谢和细胞信号传导，且对芯片数据聚类分析的结果与临床表型一致。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1 心阳虚证证候研究的意义
• 1.1 心阳虚证研究的必要性
• 1.2 心阳虚证研究现状
• 2 心阳虚证研究引入证候基因组学
• 2.1 证候基因组对心阳虚证研究的意义
• 2.2 证候基因组学的重要技术手段——基因芯片
• 2.3 心阳虚证—表达基因谱的研究意义
• 3 前期研究基础的重要借鉴
• 3.1 方法论——病证结合
• 3.2 实验重复性——效度、信度检验
• 3.3 数据分析——生物学意义为主,数理统计为辅
• 第一章 心阳虚证半定量化诊断研究
• 1.心阳虚证辨证因子及等级量化标准的制定方法
• 1.1 辨证要素的确定
• 1.2 辨证要素的评分制定原则
• 1.3 心阳虚证诊断标准的信度效度检验
• 2.心阳虚证辨证因子及等级量化标准制定结果
• 2.1 心阳虚证诊断标准——25辨证因子
• 2.2 心阳虚证等级量化标准
• 2.2.1 心阳虚证等级量化评分细则
• 2.2.2 心阳虚证轻重程度的划分
• 2.3 心阳虚证诊断标准的信度效度检验结果
• 3.讨论
• 3.1 心阳虚证诊断25辨证因子的确定
• 3.2 心阳虚证等级量化标准的确定
• 3.3 心阳虚证的信度效度检验
• 第二章 心阳虚证病证结合的临床研究
• 1 病例纳入
• 1.1 冠心病的诊断
• 1.1.1 纳入标准
• 1.1.2 排除标准
• 1.2 心阳虚证的诊断
• 1.3 植物神经系数测定
• 1.4 纳入病例情况
• 1.5 正常对照组的筛选
• 1.6 治疗
• 1.7 疗效判定
• 2 结果
• 2.1 冠心病心阳虚证量表评分分析结果
• 2.2 纳入病例情况
• 2.3 疗效对比
• 2.3.1 治疗前后心电图改善情况
• 2.3.2 治疗前后中医诊断分析结果
• 2.3.3 治疗前后血脂血流变学比较结果
• 2.3.4 治疗前后植物神经系数比较结果
• 2.3.5 正常对照组情况
• 3 讨论
• 3.1 冠心病心阳虚证诊断标准的依从
• 3.2 纳入病例情况与冠心病危险因素之间的关联
• 3.3 治疗处方的选择
• 3.4 疗效
• 3.4.1 治疗前后症状积分比较
• 3.4.2 治疗前后血脂比较
• 3.4.3 治疗前后血流变学比较
• 3.4.4 治疗前后植物神经系数比较
• 第三章 心阳虚证差异表达基因谱
• 1 材料和方法
• 1.1 标本的采集与分离白细胞
• 1.1.1 主要仪器与试剂
• 1.1.2 实验步骤
• 1.2 RNA的提取
• 1.2.1 主要仪器与试剂
• 1.2.2 实验步骤
• 1.2.2.1 物品器械的去RNA酶处理
• 1.2.2.2 总RNA的提取
• 1.2.2.3 总RNA的纯化
• 1.2.2.4 RNA样品质量检测
• 1.3 基因芯片检测
• 1.3.1 基因芯片的制备
• 1.3.1.1 主要仪器与试剂
• 1.3.1.2 基因芯片制备
• 1.3.2 对样品RNA进行荧光标记
• 1.3.2.1 双链cDNA合成
• 1.3.2.2 体外转录合成cRNA
• 1.3.2.3 随机引物反转录
• 1.3.2.4 cDNA用KLENOW酶标记
• 1.3.3 杂交组合的设计
• 1.3.4 基因芯片的杂交
• 1.3.4.1 主要仪器与试剂
• 1.3.4.2 基因芯片的杂交与清洗
• 1.3.5 基因芯片的扫描
• 1.3.6 芯片图像的采集与数据分析
• 1.4 数据分析与信息挖掘
• 1.4.1 各杂交组合之间的比对分析
• 1.4.2 差异表达基因功能的分析
• 1.4.3 芯片数据的聚类分析
• 1.4.4 分子通路分析
• 1.4.5 与冠心病相关基因的比对分析
• 1.4.6 各芯片杂交中胶原蛋白基因的分析
• 2 结果
• 2.1 基因芯片的杂交
• 2.2 差异表达基因情况
• 2.3 不同芯片之间共同差异表达基因情况
• 2.4 基因分类
• 2.5 聚类分析
• 2.5.1 10组芯片杂交聚类
• 2.5.2 8组芯片杂交聚类
• 2.5.3 6组芯片杂交聚类
• 2.6 通路分析
• 2.7 心阳虚证差异表达基因谱与冠心病相关基因比较分析
• 2.8 心阳虚证差异表达基因谱中胶原蛋白相关基因分析
• 3 讨论
• 3.1 基因芯片杂交结果的可靠性
• 3.1.1 基因芯片的质量控制
• 3.1.2 关于杂交结果的验证
• 3.2 影响差异表达基因的因素
• 3.3 各芯片组合比对的提示
• 3.4 心阳虚证差异表达基因分析
• 3.4.1 脂类代谢为主的代谢相关基因
• 3.4.2 免疫相关基因
• 3.4.3 心血管相关基因
• 3.4.4 其它功能基因
• 3.5 心阳虚证以药测证差异表达基因分析
• 3.5.1 生理过程相关基因
• 3.5.2 免疫相关基因
• 3.6 差异表达基因分类分析
• 3.7 聚类结果分析
• 3.8 心阳虚证分子通路分析
• 3.8.1 心阳虚证共同差异表达基因分子通路分析
• 3.8.2 心阳虚证能量代谢分子通路分析
• 3.9 心阳虚证冠心病相关基因分析
• 3.10 心阳虚证胶原蛋白基因分析
• 3.10.1 胶原蛋白与心肌纤维化
• 3.10.2 胶原蛋白与血管等结缔组织病变
• 3.10.3 胶原蛋白与免疫
• 结语
• 参考文献
• 综述——中医证候研究领域略览
• 1 理论研究领域
• 2.文献研究领域
• 2.1 经典文献研究
• 2.2 现代文献研究
• 2 临床证候研究领域
• 2.1 病证结合的证候研究
• 2.2 证候研究与边缘学科研究领域的结合
• 3 证候客观化研究领域
• 3.1 微观辨证
• 3.1.1 微观辨证领域与现代医学检查结合
• 3.1.2 微观辨证领域与分子生物学结合
• 3.2 宏观辨证
• 4 证候诊断标准研究领域
• 5 证候量化诊断研究领域
• 6 证候模型研究领域
• 7 证候基因组学研究领域
• 8 证候蛋白质组学研究领域
• 参考文献
• 致谢
• 附件1：6组差异表达趋势一致并大于1.5倍的177条基因列表
• 附件2：X07、X08比较差异表达趋势一致并大于2倍的36条基因列表
• 附件3：X02、X07比较差异表达趋势一致并大于2倍的51条基因列表
• 附件4：X03、X08比较差异表达趋势一致并大于2倍20条基因列表
• 附件5：X09、X10比较差异表达趋势一致并大于2倍41条基因列表
• 附件6：公开发表的学术论文、专著出版及科研成果
• 附件7：声明