导读:本文包含了细胞通透性能论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:内皮细胞通透性,微血管
细胞通透性能论文文献综述
娄丹,沙毅杰,帅怡,霍倩,李晨[1]（2019）在《高糖暴露对脑微血管内皮细胞通透性的影响》一文中研究指出目的:探讨高浓度葡萄糖暴露对脑微血管内皮细胞通透性的影响。方法:选取bEnd.3细胞系作为研究模型,检测跨内皮细胞电阻值(TEER)、碱性磷酸酶(ALP)及γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)的活性,对细胞模型的血脑屏障特征进行鉴定;再通过细胞形态学、细胞活力、细胞内乳酸脱氢酶活性及ZO-1、Occludin基因相对表达量的变化评价高糖暴露对脑微血管内皮细胞通透性的影响。结果:细胞的TEER值、ALP及γ-GT的活性随细胞培养时间的增加而逐渐升高;细胞形态学结果显示,高(本文来源于《2019全国呼吸毒理与卫生毒理学术研讨会论文集》期刊2019-10-25）
赖韶钦,李晓君,谭俊青,潘慧娟[2]（2019）在《黄连等4种中药颗粒剂对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌细胞通透性影响》一文中研究指出目的:研究黄连、五味子、乌梅、连翘颗粒剂对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌体外抑菌作用及其机制。方法:采用肉汤稀释法测定黄连、五味子、乌梅、连翘颗粒剂悬液对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度(MIC)及其抑菌前后碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)的水平。结果:连翘、乌梅、五味子、黄连4种中药颗粒剂悬液具有不同程度的抑菌作用,总蛋白(TP)抑菌前后的差异无统计学意义,抑菌前后改良Hodge试验结果无改变;碱性磷酸酶(ALP)抑菌前后的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄连、五味子、乌梅、连翘颗粒剂的抑菌作用可能通过升高ALP改变细菌的细胞壁的通透性而实现的。(本文来源于《中医药临床杂志》期刊2019年07期）
张俊杰,钟婧,张淑静,董瑞娟,葛东宇[3]（2019）在《毛蕊异黄酮对流感病毒感染HUVEC细胞通透性及其MLC磷酸化的影响》一文中研究指出目的:通过检测毛蕊异黄酮(Calycosin)对流感病毒A/PR/8/34(H1N1)感染的脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)通透性升高及其肌球蛋白轻链(MLC)磷酸化的影响来探讨其改善内皮细胞通透性的机制。方法:设置正常组、病毒组和毛蕊异黄酮组;将HUVEC接种于96孔板,MTT法检测不同浓度毛蕊异黄酮的细胞毒性;30 MOI PR8病毒感染病毒组与毛蕊异黄酮组HUVECs后,毛蕊异黄酮组加入20μg/mL毛蕊异黄酮溶液,采用内皮细胞跨膜电阻法检测各组在不同时间点的跨膜电阻值;激光共聚焦显微镜观察各组细胞内丝状肌动蛋白(Filamentous actin,F-actin)的表达和分布;Western Blot检测各组MLC、p-MLC蛋白表达水平;将MDCK接种于96孔板,用PR8病毒感染细胞,MTT法检测不同浓度毛蕊异黄酮的抗病毒活性。结果:毛蕊异黄酮对HUVEC的最大无毒浓度为40μg/mL,细胞存活率约为91.69%;毛蕊异黄酮组细胞通透性与正常组细胞相比无显着差异,但通透性显着低于病毒组(P<0.05);病毒组的F-actin发生变构、细胞中出现粗大的应力纤维,分布于胞浆中,而毛蕊异黄酮组的F-actin分布于细胞膜、应力纤维减少;与正常组相比,病毒组的p-MLC蛋白表达显着增加,差异有统计学意义(P<0.05)、与病毒组相比,毛蕊异黄酮组的p-MLC蛋白表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);毛蕊异黄酮对流感病毒感染的MDCK细胞的抗病毒作用并不明显。结论:毛蕊异黄酮可通过抑制p-MLC蛋白的表达来抑制流感病毒引起的内皮细胞通透性升高及F-actin变构的作用,从而达到保护内皮细胞的功能。(本文来源于《中华中医药学刊》期刊2019年06期）
蒋智永,胡子健,孟承颖,黄海良,段声梁[4]（2019）在《HIF-1α对大鼠内皮细胞通透性的影响及作用机制》一文中研究指出目的探讨低氧诱导因子-1 (HIF-1α)对大鼠主动脉内皮细胞通透性的影响及作用机制。方法构建HIF-1α干扰及过表达载体,应用Lipofectamine 2000转染原代大鼠主动脉内皮细胞,浓度为200μg/ml遗传霉素(G418)筛选稳转细胞株,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测HIF-1α、内皮素-1(ET-1)、内皮素受体A(ETA)、内皮素受体B(ETB)和闭锁小带(ZO-1)的表达;应用ET-1信号通路抑制剂BQ123及BQ788预处理HIF-1α过表达细胞株1 h,RT-PCR和Western blot检测HIF-1α、ET-1、ETA、ETB和ZO-1的表达,细胞膜通透性实验检测单层内皮细胞膜通透系数变化。结果与转染短发夹RNA-阴性对照组(shRNA-NC组)相比,转染shRNA-Ⅱ组HIF-1α、ET-1、ETA、ETB mRNA和蛋白表达水平均显着降低(P<0.01),ZO-1的表达则明显升高(P<0.01)。与转染GV230组比较,稳转GV230/HIF-1α组HIF-1α、ET-1、ETA、ETB mRNA和蛋白表达水平均显着升高(P<0.01),ZO-1的表达则明显降低(P<0.01);同时细胞膜通透性系数亦明显升高(P<0.01);应用BQ123和BQ788处理能够抑制HIF-1α诱导的ETA和ETB表达、增强ZO-1的表达,同时细胞膜通透性系数明显降低(P<0.01)。结论 HIF-1α可通过上调ET-1的表达进而增加大鼠主动脉内皮细胞的通透性,HIF-1α/ET-1信号轴在调控烧伤大鼠血管通透性方面具有重要作用。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2019年07期）
段声梁,胡子健,孟承颖,黄海良,蒋智永[5]（2019）在《烧伤大鼠血清对血管内皮细胞通透性的影响》一文中研究指出目的探讨烧伤大鼠血清对血管内皮细胞(EC)通透性的影响及作用机制。方法将原代培养的大鼠主动脉EC根据是否应用烧伤血清干预分为正常组和血清干预组,血清干预组应用烧伤12 h大鼠血清干预大鼠主动脉内皮细胞24 h,应用细胞通透性实验检测单层细胞膜通透性变化,实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot分别检测细胞通透性相关基因内皮素-1(ET-1)、内皮因子受体A(ETA)、ETB和带状闭合蛋白1(ZO-1)的mRNA和蛋白表达的变化。结果与正常组相比,烧伤大鼠血清干预组EC通透性系数明显升高(P<0.01),血清干预组ET-1、ETA和ETB的mRNA和蛋白表达均显着升高(P<0.01)、ZO-1的mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论烧伤大鼠血清可引起血管EC通透性的增加,通透性增加可能与ET-1、ET-A、ET-B表达升高和ZO-1表达降低有关。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2019年06期）
王亚,兰媛,傅威,刘晓青,黄勇波[6]（2019）在《机械牵张对人肺血管内皮细胞通透性的影响及其分子机制》一文中研究指出目的观察机械牵张对人肺动脉内皮细胞(HPAEC)和人肺微血管内皮细胞(HPMVEC通透性的影响及对通透性关键蛋白VE-cadherin、Claudin-5和Caveolin-1表达的调控。方法采用机械牵张装置Flexcell FX-5000T对HPAEC(ATCC)和HPMVEC(ATCC)施加0.5 Hz频率10%或20%牵张应力。应用qRT-PCR及Western Blot方法检测机械牵张前后内皮通透性关键蛋白VEcadherin、Claudin-5、Caveolin-1 mRNA和蛋白含量表达变化。采用细胞动态分析仪以及Transwell小室/异硫氰酸荧光素(FITC)-白蛋白法检测机械牵张后的HPAEC细胞和HPMVEC细胞通透性改变。结果 20%机械牵张后,与对照组比较,HPAEC细胞通透性关键蛋白VE-cadherin mRNA和蛋白表达、Claudin-5 mRNA和蛋白表达和Caveolin-1 mRNA表达均下降(P <0.05),而Caveolin-1蛋白水平较对照组无明显变化;HPMVEC细胞通透性关键蛋白VE-cadherin mRNA和蛋白表达,Caveolin-1 mRNA和蛋白表达均下降(P <0.05),而Claudin-5 m RNA和蛋白水平较对照组无明显变化。结论机械牵张会导致肺血管内皮通透性增高,是通过下调通透性关键蛋白的表达,并且两种细胞的通透性影响机制有差异,HPAEC牵涉紧密连接,HPMVEC牵涉跨内皮细胞途径。(本文来源于《中华重症医学电子杂志(网络版)》期刊2019年02期）
李利群[7]（2019）在《镉与双氢青蒿素对肾小球血管内皮细胞通透性的调控机制研究》一文中研究指出研究背景随着经济和工业的不断发展,越来越多的环境毒素及食品安全问题日益危害着人类的健康。重金属元素镉,于上世纪90年代被国际癌症研究机构(IARC)确定为致癌物,是常见的环境毒物和食品污染物。镉的生物半衰期较长(10-30年)且排泄率低,经呼吸道和消化道进入机体后有选择的蓄积于肾脏、肝脏、肺脏、心血管系统和免疫系统,经过生物积累,对组织和器官造成损伤。肾脏是镉最重要的蓄积部位和靶器官,急性或慢性镉中毒均可影响肾脏的排泄机制。镉通过呼吸或饮食等途径进入人体循环系统后,与肾脏中的金属硫蛋白(metallothionein,MT)形成镉硫蛋白(Cd-MT),经血液循环到达肾脏,直接或间接产生肾脏毒性。研究表明,镉不仅可以造成肾小管重吸收功能障碍,还可以直接损伤肾小球滤过功能导致蛋白尿的发生。人肾小球血管内皮细胞(human renal glomerular endothelial cells,HRGECs)位于肾小球滤过屏障的最内层,直接与血液中镉硫蛋白接触,是首当其冲的受害细胞。镉离子不仅可以直接损伤内皮细胞,还可以通过改变内皮细胞间的连接蛋白组分,破坏内皮细胞间的细胞连接结构,增加其通透性,进而导致蛋白尿的发生发展。黏附连接参与血管内皮通透性的调节作用,VE-cadherin(血管内皮细胞钙黏素)作为黏附连接的重要成员,其结构或功能状态与血管内皮通透性的变化密切相关。VE-cadherin与β-catenin等多种蛋白形成复合体,与p38 MAPK等信号传递蛋白相互作用,维持正常的血管内皮细胞屏障结构和功能。因此,我们采用暂时性(1 h),低剂量(1 μM)氯化镉刺激体外培养的HRGECs,观察特定时间,剂量下镉离子对HRGECs通透性的影响及探究其相关分子机制。研究目标(1)确认低剂量,暂时性镉暴露对肾小球血管内皮细胞通透性的损害作用。(2)确认MAPK信号通路在调控低剂量,暂时性镉暴露诱导的肾小球血管内皮细胞高通透性中的作用。研究方法(1)细胞处理用终浓度为0,0.1,1,10μM的氯化镉刺激HRGECs,以选择药物浓度。后续实验中选择氯化镉终浓度为1μM 刺激时间为1小时。为确认氯化镉对MAPK信号通路的影响,加入终浓度为10 μM的MAPK信弓号通路抑制剂PD98059,SP600125,SB203850进行预刺激HRGECs1 小时,以阻断 MAPK信号通路。(2)细胞增殖及活力实验用浓度为0,0.1,1,10 μM的氯化镉刺激HRGECs 1小时后,采用MTT增殖实验及台盼蓝染色实验,检测细胞增殖能力与细胞活力。(3)流式细胞术检测细胞凋亡实验将细胞分为对照组(PBS)、氯化镉(细胞与1 μM CdCl2共同培养1小时)组,采用Annexin V/PI双染法测定细胞凋亡率。(4)Transwell FITC细胞通透性实验将各组细胞接种于上层小室中,用浓度为0,0.1,1,10μM的氯化镉刺激HRGECs,1小时后使用FITC-dextran,通过荧光酶标仪分析各组细胞的通透性变化。(5)电子细胞基质阻抗判断技术(Electric cell-substrate impedance sensing,ECIs)将各组细胞接种于ECIs电极板中,设对照组(PBS)、氯化镉(细胞与1 μM CdCI2共同培养1小时)组、氯化镉+PD98059组、氯化镉+SP600125组、氯化镉+ SB203850组。给予电流刺激后,当通过基底电极板到培养液的电流通过细胞层时,细胞的通透性变化均可导致可测量的电阻值发生变化。(6)实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-qPCR)将细胞分为对照组(PBS)、氯化镉(细胞与1 μM CdC12共同培养1小时)组,提取细胞总RNA,并利用试剂盒反转录合成的cDNA为模板,进行RT-qPCR反应,检测CDH5,CTNNB1基因表达水平变化。(7)蛋白免疫印迹(Westen Blot,WB)将细胞分为对照组(PBS)、氯化镉(细胞与1 μM CdCl2共同培养1小时)组、氯化镉+ PD98059组、氯化镉+SP600125组、氯化镉+SB203850组,提取细胞总蛋白,Western Blot检测MAPK信号通路蛋白水平变化。(8)免疫荧光将细胞分为对照组(PBS)、氯化镉(细胞与1 μM CdCl2共同培养1小时)组和氯化镉+ SP600125组,通过免疫荧光实验检测氯化镉对肾小球血管内皮细胞黏附连接蛋白VE-cadherin和β-catenin表达的影响。研究结果(1)MTT、台盼蓝结果显示,当浓度低于10 μμM时,氯化镉对HRGECs的增殖能力和活力无明显影响。流式细胞术实验结果显示,低剂量(1 μM),暂时性(1小时)镉暴露对HRGECs的凋亡作用无显着影响。(2)免疫荧光结果显示,低剂量(1 μM),暂时性(1小时)镉暴露能诱导VE-cadherin和β-catenin蛋白在细胞膜上重新定位,导致VE-cadherin失去稳定性而发生内吞,使细胞膜连接处VE-cadherin蛋白减少。而p38 MAPK信号通路抑制剂SB203850可有效逆转氯化镉诱导VE-cadherin和β-catenin蛋白的重新分布,改善细胞通透性。(3)Traswell FITC-dextran通透性实验结果显示,1μM和10 μM浓度的氯化镉暴露均可导致HRGECs通透性增高。(4)WB实验结果显示,低剂量(1 μM),暂时性(1小时)镉暴露能激活MAPK信号通路。而抑制剂PD98059、SP600125、SB203850能有效抑制镉诱导的MAPK信号通路的激活。(5)ECIs实验结果显示,加入p38 MAPK信号通路抑制剂SB203850能阻断镉诱导的肾小球血管内皮细胞高通透性现象。研究结论低剂量(1 μM),暂时性(1小时)氯化镉刺激虽然对肾小球血管内皮细胞增殖、迁移和凋亡没有显着影响,但仍能通过诱导VE-cadherin和β-catenin排列紊乱影响到肾小球血管内皮细胞的通透性。而特异性阻断p38 MAPK信号通路能降低镉离子诱导肾小球血管内皮细胞高通透性现象,为临床治疗镉污染相关疾病提供了新的思路。研究背景血管内皮销黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)是细胞黏附连接的主要蛋白,并特异性表达在血管内皮细胞上。VE-cadherin结构功能的改变与血管内皮屏障的通透性密切相关。近年来,VE-cadherin在肾脏疾病领域受到广泛关注,越来越多的证据表明VE-cadherin广泛参与多种肾脏疾病的发生、发展过程,尤其在调节肾小球微血管内皮的通透性,降低蛋白尿等方面发挥着重要作用。青蒿素(Artemisinin,ART)是从黄花蒿茎叶中提取的一种含有过氧基团倍半蔽内酷类物质,广泛用于抗拒治疗且副作用小。双氧青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)是青蒿素的半合成衍生物,在体内具有吸收快,分布广,毒性小,排泄快等优点。研究表明,DHA具有抑制人脐静脉内皮细胞增殖、迁移和管样结构形成等作用,但是DHA对内皮细胞通透性的影响尚不明确。本文通过探究DHA与VE-cadherin的相互作用关系及DHA调控VE-cadherin功能的相关机制,明确了DHA可以通过增加VE-cadherin的表达,降低肾小球血管内皮细胞的通透性,在一定程度上降低蛋白尿的发生。证实了双氢青蒿素在肾小球血管内皮细胞中抗通透性增高的具体作用机制,为DHA应用于临床治疗慢性肾脏疾病提供了基础理论依据。研究目标体外细胞学实验确认DHA对肾小球血管内皮细胞通透性的调控作用及其机制。研究方法(1)蛋白免疫印迹(WestemBlot,WB)将细胞分为对照组(PBS)、双氢青蒿素(25 pM)组,24小时后提取细胞总蛋白,Western Blot分析VE-cadherin,Snail、Slug,Smad2/3及怜酸化Smad2/3蛋白水平变化。(2)实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,TR-qPCR)将细胞分为对照组(PBS)、双氢青蒿素(25pM)组,24小时后提取细胞总RNA,并利用试剂盒反转录合成的cDNA为模板,进行RT-qPCR反应,检测VE-cadherin,Snail、Slug基因表达水平。(3)免疫荧光将细胞分为对照组(PBS)、双氢青蒿素(25 pM)组,通过免疫荧光实验检测DHA对VE-cadherin蛋白表达的影响。(4)染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)通过超声裂解DHA刺激后的HRGECs,得到最佳长度的DNA片段,加入Snail、Slug蛋白抗体获取目的片段DNA,经纯化后,用VE-cadherin启动子引物进行PCR扩増,检测转录因子Snail、Slug与VE-cadherin启动子结合的能力。研究结果(1)WB,RT-qPCR和免疫荧光实验结果表明,双氢青蒿素特异性上调HRGECs中VE-cadherin蛋白和mRNA的表达。(2)WB实验结果表明,双氢青蒿素刺激HRGECs后,TGF-β受体蛋白I及磷酸化Smad2/3蛋G明显降低,而Smad2/3总蛋G无变化。表明DHA可抑制TGF-β RI信号通路的激活。(3)WB和RT-qPCR实验结果表明,双氢青蒿素特异性下调HRGECs中Snail、Slug蛋白和mRNA的表达。(4)染色质免疫共沉淀实验结果证实,双氢青蒿素通过特异性减少Snail、Slug与VE-cadherin启动子的结合,来降低VE-cadherin启动子活性,导致VE-cadherin表达降低。研究结论双氢青蒿素通过抑制TGF-β RI-Smad2/3信号通路及其下游转录因子Snail、Slug蛋白表达,下调Snail、Slug和VE-cadherin启动子的结合从而调控VE-cadherin启动子的活性,增加VE-cadherin蛋白及基因的表达,从而降低肾小球血管内皮细胞的通透性。研究背景重金属污染物镉,可通过食物链进入人体而危害人体健康。镉在人体可作用于多个不同器官,产生不同的毒理作用,如肾损害、心血管损害、骨骼损害、免疫系统损害、肿瘤等。肾脏是镉慢性毒性作用的主要靶器官。镉在近曲小管和部分远曲小管中积聚,导致肾小管重吸收功能受损,引发肾小管退行性病变。镉以与低分子量金属硫蛋白结合形成复合物的形式存在于血液循环中,可直接接触肾小球血管内皮细胞,产生细胞毒性,影响肾小球滤过屏障功能。研究表明,镉可以诱导多种细胞的死亡,但镉对肾小球血管内皮细胞的作用还不甚明确。NF-κβ是普遍存在于真核细胞的一种核转录因子。静息状态下,其与抑制因子IkBoc结合而处于非活化状态,并滞留在细胞质中。当细胞受到胞内外刺激后,会启动相应的信号传导通路,激活IkB激酶,磷酸化IkBci蛋白并使其降解,释放出NF-κβ二聚体。NF-κβ二聚体通过各种翻译后的修饰作用而被进一步激活,并入核行使其转录因子功能,诱导靶基因表达。NF-κβ调节众多基因的表达,参与多种病理生理过程,在细胞增殖、分化、凋亡和自噬中也扮演着重要角色。在本文中,我们探究了低浓度镉对人肾小球血管内皮细胞影响,并选用NF-κβ抑制剂PDTC,来探讨NF-κβ信号通路的阻断对于镉介导的人肾小球血管内皮细胞生存的影响,并且探究在此过程中相关的分子机制。研究目标(1)确认氯化镉对人肾小球血管内皮细胞凋亡的作用。(2)确认NF-κβ信号通路在调控镉介导的人肾小球血管内皮细胞凋亡中的作用。研究方法(1)细胞处理细胞用4 pM氯化镉刺激细胞24小时后进行检测。加入终浓度为10的NF-κβ信号通路抑制剂PDTC进行预刺激HRGECs 1小时,以阻断NF-κβ信号通路。加入终浓度为10 pM的信号通路抑制剂SP600125进行预刺激HRGECs 1小时,以阻断JNK信号通路。(2)细胞活力实验将细胞分为对照组、氯化镉组、PDTC组、氯化镉+PDTC组。采用台盼蓝染色实验,检测细胞活力。(3)流式细胞术检测细胞凋亡实验将细胞分为对照组、氯化镉组、PDTC组、氯化镉+PDTC组、氯化镉+PDTC组+SP600125组,采用Annexin V/PI双染法测定细胞凋亡率。(4)蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)将细胞用4氯化镉刺激0,1,6,12,24小时后,提取细胞总蛋白,Western Blot检测IkBcx蛋白水平变化;将细胞分为对照组、氯化镉+PDTC组,分别提取0,1,6小时刺激后细胞总蛋白,Western Blot检测JNK和p-JNK蛋白水平变化。(5)免疫荧光将细胞分为对照组、氯化镉组,通过免疫荧光实验检测肾小球血管内皮细胞p65蛋白的表达水平。(6)数据分析同第一部分实验结果(1)WB实验结果显示,氯化镉可以显着降低HRGECs细胞质中的IkBcx蛋白表达水平。免疫荧光结果显示,经氯化镉处理后,HRGECs中NF-κβ p65蛋白核内转移增加,即表明氯化锚可以激活HRGECs中的NF-κβ信号通路。(2)流式细胞术及细胞活力实验结果显示,单独用4 pM氯化镉及PDTC处理HRGECs后,其凋亡能力及细胞活性无明显改变。而氯化镉与PDTC同时处理HRGECs后,其凋亡率显着增加而细胞活性显着降低。这表明通过抑制NF-κβ信号通路能引起HRGECs的死亡及活力下降,从而抑制细胞生存。(3)WB实验结果显示,氯化镉可以增加HRGECs细胞中磷酸化JNK蛋白的表达。而相对于单独使用氯化镉,氯化镉与PDTC同时处理HRGECs后,磷酸化JNK蛋白表达量会显着增加。这表明JNK信号可以被氯化镉激活的NF-κβ通路所抑制。(4)流式细胞术结果显示,在氯化镉与PDTC细胞处理组中加入JNK抑制剂SP600125后,其凋亡率下降。表明NF-κβ可以通过抑制JNK通路来部分逆转氯化镉引起的HRGECs的凋亡。研究结论氯化镉通过激活NF-κβ信号通路,并以JNK为作用靶点,维持镉暴露后HRGECs的存活。(本文来源于《山东大学》期刊2019-05-25）
孔琪玲[8]（2019）在《类泛素蛋白FAT10调控内皮细胞通透性的作用及机制》一文中研究指出研究背景:血管壁通透性增加是导致心血管疾病的重要病因之一,如血管炎症、动脉粥样硬化及脑卒中等,而增加血管通透性的病理机制尚未充分阐明。类泛素蛋白FAT10是新近发现的类泛素蛋白家族成员之一,在炎症,肿瘤,自噬,凋亡,DNA损伤应答等方面均发现有重要作用。然而FAT10对血管内皮细胞通透性的调控作用未见报道。研究目的:本研究通过在体动物和离体细胞实验探索FAT10调控血管内皮细胞通透性的作用及其机制。研究方法:在体动物实验:Crispr/cas9技术构建FAT10基因敲除小鼠(FAT10~(-/-)),利用角叉菜胶构建小鼠背部皮下炎症模型,通过背部皮下炎症灌洗液白细胞总数及分类检测血管通透性改变,将实验小鼠分为4组:对照组(WT组)、FAT10敲除组(FAT10~(-/-)组)、正常+炎症刺激组(WT+炎症组)、FAT10敲除+炎症刺激组(FAT10~(-/-)+炎症组);组织学苏木-伊红(Hemotoxylin&Eosin,HE)染色检测组织学改变等。体外细胞实验:选择人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为研究对象,通过人重组干扰素(IFN-γ)及肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导处理,构建细胞炎症模型,并给予过表达或干扰FAT10腺病毒、转染FAT10质粒及N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-l-cysteine,NAC)处理,将细胞分为12组:正常对照组(con组)、溶剂对照组(Vehicle组)、TNF-α及IFN-γ诱导组(TNF-α+IFN-γ组)、过表达阴性病毒对照组(ad-Ctrl组)、过表达FAT10组(ad-FAT10组)、干扰阴性病毒对照组(sh-Ctrl组)、干扰FAT10组(sh-FAT10组)、转染Flag质粒组(Flag组)及其NAC处理组(Flag+NAC组)、转染FAT10质粒组(FAT10组)及其NAC处理组(FAT10+NAC组)、干扰FAT10片段组(sh-FAT10组)及其NAC处理组(sh-FAT10+NAC组);Western-Blot检测FAT10蛋白表达,巨噬细胞transwell迁移实验检测内皮细胞通透性在NAC处理前后的改变及共聚焦检测ROS的改变。研究结果:1.在体实验结果显示:与con组相比,FAT10~(-/-)组小鼠背部炎症气囊灌洗液中,白细胞总数降低(平均值1.775×10~9个/L vs 4.922×10~9个/L,P<0.05);背部炎症组织HE染色可见FAT10~(-/-)小鼠的血管内皮下炎症细胞浸润减少,新生小血管的形成也减少,管腔内炎症免疫细胞数量较少。2.离体细胞实验结果表明:与con组相比,TNF-α+IFN-γ组中FAT10的蛋白表达水平升高(P<0.05);且与ad-Ctrl组相比,ad-FAT10组中巨噬细胞迁移的数目增多(P<0.001);与ad-FAT10组相比,sh-FAT10组迁移的巨噬细胞数目减少(P<0.001)。3.共聚焦结果显示与Flag组相比,FAT10组中ROS明显增加(P<0.001,N≥6),sh-FAT10组中ROS降低(P<0.01)。在NAC处理后的巨噬细胞transwell结果显示,与Flag组相比,FAT10组中穿透过去的巨噬细胞数量明显增多(P<0.05,N≥6),sh-FAT10组中巨噬细胞数量减少(P<0.05);且与FAT10组相比,FAT10+NAC组中巨噬细胞数量下降(P<0.05)。结论:炎症因子可诱导血管内皮细胞高表达FAT10,经增加ROS的产生,从而增加内皮细胞通透性,使得炎症细胞及炎性物质渗出增多,加重并维持血管慢性炎症反应。本研究结果为后续深入了解其机制提供实验依据。(本文来源于《南昌大学》期刊2019-05-01）
蔡倩,郭慕真,朱晨笛,黄敏[9]（2019）在《p115RhoGEF/RhoA信号通路在高糖致脑微血管内皮细胞通透性异常中的作用》一文中研究指出目的探讨p115RhoGEF/RhoA信号通路在高浓度葡萄糖(Glucose)致小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3通透性异常中的作用。方法体外培养小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3),构建单层血脑屏障体外模型。通过ESR电阻仪测定跨内皮细胞间电阻(TEER),分光光度法检测碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷胺酞胺转移酶(γ-GT)活性以评估其屏障功能;对照组(5.6mmol/L葡萄糖)、高糖诱导组(15.6、25.6、35.6、45.6mmol/L葡萄糖)处理细胞48h,MTT检测细胞相对存活率,分光光度法检测培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性,免疫印迹法(Western blot)检测紧密连接蛋白ZO-1、Occludin表达水平,评估高糖对脑微血管内皮细胞通透性的影响;Western blot检测不同浓度葡萄糖处理细胞后p115RhoGEF蛋白表达水平,体外蛋白与蛋白结合试验(Pull-Down)检测RhoA活性。转染p115RhoGEF-siRNA建立p115RhoGEF基因沉默的bEnd.3细胞模型,检测不同处理组RhoA活性及p115RhoGEF、TJ蛋白表达水平。结果细胞TEER值随培养时间延长逐渐升高,ALP、γ-GT活力均随时间延长逐渐升高;与对照组比较,35.6、45.6mmo/L葡萄糖诱导组的细胞活力出现明显下降作用,且诱导时间越长,细胞存活率越低(P<0.05);35.6mmol/L葡萄糖诱导组的LDH水平明显升高(P<0.05);随着葡萄糖浓度升高,ZO-1、Occludin蛋白表达下降而p115RhoGEF蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);Pull-down结果显示,25.6、35.6mmol/L葡萄糖组的RhoA活性较对照组明显升高(P<0.05)。细胞转染p115RhoGEF-siRNA后,p115RhoGEF蛋白表达较对照组明显下降;高糖诱导48h后,与NCsiRNA组比较,p115RhoGEF-siRNA组的GTP-RhoA活性下降、 ZO-1、 Occludin表达水平明显上调(P<0.05)。结论高糖通过诱导p115RhoGEF/RhoA信号通路活化,下调紧密连接蛋白表达,引起脑微血管内皮细胞通透性增加。[营养学报,2019,41(2):154-162](本文来源于《营养学报》期刊2019年02期）
胡文龙[10]（2019）在《梅毒螺旋体诱导巨噬细胞外泌体中miR-146a-5p降低血管内皮细胞通透性及炎细胞跨内皮迁移》一文中研究指出目的:鉴定来源于梅毒螺旋体(Treponema pallidum subsp.Pallidum,Tp)刺激后的巨噬细胞分泌外泌体中miRNA表达谱。探讨目标miR-146a-5p对血管内皮细胞通透性及单个核细胞跨内皮迁移的作用及其相关机制。方法:将Tp接种于雄兔睾丸,建立感染模型,获取足量、高纯度梅毒螺旋体。ExoQuick-TCTM试剂盒提取Tp刺激巨噬细胞分泌的外泌体,予以透射电镜、NTA及Western blot鉴定。提取Tp刺激组和对照细胞外泌体中的miRNA进行芯片鉴定,筛选差异性miRNA。选择差异性表达较明显的miR-146a-5p作为研究对象,RT-qPCR进一步验证miR-146a-5p的表达情况。提取20个早期梅毒患者和20名健康对照血浆外泌体,RT-qPCR验证miR-146a-5p的表达情况。外泌体与HUVEC共培养后通过激光共聚焦显微镜和RT-qPCR的方法验证miR-146a-5p在细胞间传递。应用Transwell构建HUVEC单层模型,检测外泌体中miR-146a-5p对HUVEC单层的通透性及单个核细胞跨内皮迁移的影响。应用双荧光素酶报告基因检测法对miR-146a-5p与JAM-C基因3'-UTR的相互作用进行验证,流式细胞技术检测过表达和抑制miR-146a-5p后HUVEC细胞JAM-C蛋白的表达。siRNA敲低HUVEC中JAM-C检测对通透性及单个核细胞跨内皮迁移变化情况。结果:1.透射电镜下可见外泌体成杯托状的微小囊泡,直径40～100nm。Western blot检测提示外泌体丰富表达膜蛋白CD9、CD63、CD81。NTA检测发现实验组和对照组外泌体浓度无明显差异(t=2.78,P>0.05)。2.miRNA芯片鉴定出65个差异性miRNA,其中上调35个,下调30个。miR-146a-5p在12小时、24小时和48小时分别上调8.07倍、7.35倍和17.70倍,RT-qPCR验证结果显示实验组miR-146a-5p表达较对照组明显升高(12h,t=4.44,P<0.01;24h,t=2.79,P<0.05;48h,t=3.10,P<0.05)。早期梅毒患者血浆外泌体中 miRNA-146a-5p较健康对照组明显升高(t=2.82,P<0.01)。3.将Cy3标记miR-146a-5pmimic转染至巨噬细胞,通过免疫荧光显微镜可观察到Cy3标记miR-146a-5p伴随外泌体可传递到HUVEC,并且可导致HUVEC中miR-146a-5表达显着升高(t=2.98,P<0.05),而提前用10μM GW4869处理巨噬细胞24小时后RT-qPCR结果显示两组间miR-146a-5表达无差异(t=1.11,P>0.05)。4.富含miR-146a-5p外泌体与HUVEC共培养可显着降低HUVEC单层通透性和单个核细胞跨内皮迁移数量。5.双荧光素酶报告实验结果显示miR-146a-5p mimic对含野生型JAM-C全长的荧光素酶报告基因载体荧光素酶活性的直接抑制作用,miR-146a-5p mimic可抑制HUVEC 细胞 JAM-C 表达而 miR-146a-5p inhibitor 可使 HUVEC 细胞 JAM-C 表达显着增高。siRNA敲低JAM-C可使HUVEC单层通透性和单个核细胞跨内皮迁移降低。结论:1.通过梅毒螺旋体感染动物模型获得的高纯度有活性的Tp刺激巨噬细胞获得的外泌体可用于下游实验。2.梅毒螺旋体刺激巨噬细胞可使其分泌的外泌体中miR-146a-5p表达增高。3.巨噬细胞分泌的外泌体中miR-146a-5p可以传递给血管内皮细胞。4.外泌体中miR-146a-5p可通过抑制血管内皮细胞的靶基因JAM-C使血管内皮细胞通透性及单个核细胞跨内皮迁移降低。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2019-04-01）
细胞通透性能论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:研究黄连、五味子、乌梅、连翘颗粒剂对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌体外抑菌作用及其机制。方法:采用肉汤稀释法测定黄连、五味子、乌梅、连翘颗粒剂悬液对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度(MIC)及其抑菌前后碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)的水平。结果:连翘、乌梅、五味子、黄连4种中药颗粒剂悬液具有不同程度的抑菌作用,总蛋白(TP)抑菌前后的差异无统计学意义,抑菌前后改良Hodge试验结果无改变;碱性磷酸酶(ALP)抑菌前后的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:黄连、五味子、乌梅、连翘颗粒剂的抑菌作用可能通过升高ALP改变细菌的细胞壁的通透性而实现的。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞通透性能论文参考文献
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