论文摘要
狼毒（Stellera chamaejasme）,又名断肠草（内蒙古）,拔萝卜燕子花（河北）,馒头花（青海）,是瑞香科（Thymelaeaceae）狼毒属（Stellera）多年生草本植物,是我国传统中药狼毒的正品,也是重要的蒙药和藏药,有清热解毒、消肿、泻火、止溃疡、祛腐生肌之功效。本研究以瑞香科狼毒属狼毒的叶片为外植体,探讨了不同浓度的2,4-D对愈伤组织诱导率的影响,得到了诱导愈伤组织的最佳2,4-D浓度；进行了不同接种量的细胞生长动态研究,确定了增殖培养适宜的接种量,并着重探讨了生长素类和细胞分裂素类对愈伤组织增殖培养的效应,获得了愈伤组织增殖的最佳培养基配方；用比色法测定了愈伤组织中总黄酮的含量,研究生长素和细胞分裂素类对愈伤组织总黄酮累积的影响；采用DPPH自由基清除法探究了愈伤组织总黄酮提取物的抗氧化活性。本研究为狼毒的开发利用奠定了基础。主要结论归纳如下：1.以狼毒的叶片为外植体,诱导愈伤组织的最佳2,4-D浓度为1.0mg/L,诱导率可达98.33%,愈伤组织呈淡黄色,致密。2.愈伤组织生长量的动态研究表明：鲜重和干重的生长曲线均呈“S”型,明显地分为：延迟生长期、指数生长期和衰减期。3.单独使用2,4-D和KT对狼毒愈伤组织的增殖效应不明显并严重褐化；单独使用NAA增殖效应明显但褐化较明显；单独使用6-BA增殖效应很好但轻微褐化；单独使用TDZ增殖效应最好。生长素与细胞分裂素组合对愈伤组织的增殖效应比单一的植物生长调节剂好。MS+NAA0.5mg/L+TDZ1.0mg/L是最佳增殖培养基,鲜重为14.49g/瓶,是初始接种量的28.98倍,干重为0.61g/瓶,为初始接种量的25.41倍。4.单独使用NAA和6-BA可促进愈伤组织中总黄酮的累积,而培养基中附加不同浓度的TDZ时总黄酮的累积均低于NAA和6-BA。总黄酮累积的最佳培养基配方为MS+NAA1.0mg/L+6-BA0.25mg/L总黄酮含量达10.779mg/g,明显高于野生狼毒根（总黄酮含量为10.104mg/g）。5.各样品总黄酮提取液都有明显的抗氧化活性,3.125μ1提取液的DPPH自由基消除率为42.222%-91.143%,且与总黄酮含量相关,相关系数为0.719; MS+NAA1.0mg/L+6-BA0.25mg/L和MS+NAA1.0mg/L+6-BA0.5mg/L培养基培养的愈伤组织总黄酮的体外抗氧化活性高于野生狼毒根,且野生狼毒根总黄酮的体外抗氧化活性高于抗坏血酸（Vc）。