青刺果总黄酮的提取工艺及其对糖尿病小鼠降血糖效应的研究

论文摘要

糖尿病（Diabetes Mellitus,DM）是一种严重危害人民健康的慢性疾病,以高血糖代谢为特征,持续高血糖带来氧化应激增加,引起各种慢性并发症。已成为继心脑血管疾病、肿瘤之后的重大流行病之一。因此寻找治疗糖尿病新药,特别是寻找对糖尿病引起的并发症有显著疗效的天然药物,已成为防治糖尿病的当务之急。其中,天然黄酮类化合物独特的药理方式和良好的疗效,已成为降血糖新药开发和研究的热点之一。青刺果（Prinsepia Utilis Royle）为蔷薇科扁核木属植物总花扁核的果实,文献报道青刺果油具有辅助降血脂和降血糖作用,而未见青刺果中黄酮成分的降血糖作用报道。为了给防治糖尿病寻找新的黄酮资源,本研究对青刺果总黄酮（Total flavonoids from Prinsepia utilis Royle,FPR）的提取工艺、定性鉴定和含量测定方法进行了探讨,以便得到青刺果总黄酮最佳的提取工艺;为了探讨其降血糖作用,进行了动物降血糖试验,观察了其对糖尿病小鼠的血糖（Blood Glucose,GLU）、总胆固醇（Total Cholesterol,TC）;甘油三酯（triglyceride,TG）;极低密度脂蛋白（Very Low DensityLipoprotein Vholesterol,VLDL-C）,谷丙氨酸氨基转移酶（Alanine Aminotransferase,ALT）,天冬氨酸氨基转移酶（Aspartate Aminotransferase,AST）和尿素氮（Blood Urea Nitrogen,BUN）等指标的影响;通过观察其对糖尿病小鼠心、肝、肺、肾脏器组织的保护作用,初步探讨了其对糖尿病所致并发症的疗效。主要研究结果如下:1.研究青刺果总黄酮的提取工艺和含量。本研究运用有机溶剂萃取法、碱溶酸沉法及结晶法探讨了青刺果总黄酮的提取工艺,并以芦丁为对照品,采用颜色反应和薄层层析对青刺果总黄酮进行理化鉴别,用紫外分光光度法测定含量。结果表明与有机溶剂萃取法、碱溶酸沉法比较,以结晶法制备青刺果总黄酮效果较好,总黄酮含量为33.6%。2.本试验采取腹腔注射四氧嘧啶-Alloxan,ALX（200 mg/kg）建立糖尿病小鼠模型,造模成功后,将糖尿病模型小鼠随机分为:模型对照组（Diabetes mellitus group,DM）组（不治疗组）,阿卡波糖治疗组（Acarbose group,AR）组（20 mg/kg）（阳性药物治疗组）,青刺果总黄酮治疗组（Total flavonoids from Prinsepia utilis Royle group,FPR）组（300 mg/kg）,同时另设一个正常组（Normal control group,NC组）,治疗组每天灌胃给药一次,模型对照组和正常组每天灌胃生理盐水一次。于试验后第2周和第4周末空腹采血测GLU,TC,TG,VLDL-C,ALT,AST和BUN等指标。结果表明:与模型对照组相比:青刺果总黄酮能极显著降低GLU,TG和AST水平（P＜0.01）,能显著降低VLDL-C,ALT和BUN水平（P＜0.05）。3.为探讨青刺果总黄酮对糖尿病小鼠所致并发症的疗效,本研究于试验的第2周和4周末,处死部分小鼠,取心、肝、肺、肾,部分组织用于制作石蜡切片,HE（Hematoxylin and Eosin）或Gomori或PAS（Periodic acid Schiff）染色,光镜观察其变化;4周末的部分肾组织用于制作超薄切片,电镜观察其变化。结果如下:与模型对照组相比,青刺果总黄酮治疗组各器官的病理变化都相对较轻,具体表现为:光镜下,心肌纤维纵横纹较清楚,心肌纤维嗜酸性变减轻;肝脏指数显著降低,肝细胞索状结构清楚,肝细胞呈轻微的颗粒变性;肺泡腔增大,肺泡壁基本恢复正常,肺间质、支气管周围有少量的网状纤维和胶原纤维,肺出血得到缓解;肾脏指数极显著降低（P＜0.01）,肾小球体积较小,系膜细胞相对减少,肾小球基底膜无明显增厚,间质少量炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞基本恢复正常,肾小管内糖原沉积减少,肾小管间质网状纤维和胶原纤维含量减少。电镜下,肾小管上皮细胞线粒体基本恢复正常,足细胞突起排列整齐。由此可见,青刺果总黄酮能减轻糖尿病小鼠心肌、肝脏、肺脏和肾脏的病理变化,对糖尿病小鼠心、肝、肺、肾具有保护作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 第一部分 文献综述和选题背景
• 第一章 黄酮类物质抗糖尿病及其并发症的作用机制
• 1 概述
• 2 胰岛素的生物学作用及黄酮刺激β细胞分泌胰岛素或类胰岛素作用
• 2.1 胰岛素的生物学作用
• 2.2 黄酮刺激β细胞分泌胰岛素或类胰岛素作用
• 3 糖尿病中的氧化损伤与黄酮的抗氧化作用
• 3.1 糖尿病中的氧化损伤
• 3.1.1 氧化应激
• 3.1.2 糖尿病状态下活性氧的异常增多与其氧化损伤
• 3.2 黄酮的抗氧化作用
• 4 非酶糖基化终末产物（AGEs）的有害性及黄酮抗蛋白质非酶糖基化作用
• 4.1 糖尿病时AGEs增多的原因及AGEs的有害性
• 4.1.1 糖尿病时AGEs增多的原因
• 4.1.2 AGEs的有害性
• 4.2 黄酮抗蛋白质非酶糖基化作用
• 5 α-葡萄糖苷酶抑制剂治疗糖尿病的作用及黄酮对α-葡萄糖苷酶的抑制作用
• 5.1 α-葡萄糖苷酶抑制剂治疗糖尿病的作用
• 5.1.1 α-葡萄糖苷酶的作用
• 5.1.2 α-葡萄糖苷酶抑制剂的作用原理
• 5.2 黄酮对α-葡萄糖苷酶的抑制作用
• 第二章 选题背景和试验研究的目的与意义
• 第二部分 试验研究
• 第一章 青刺果总黄酮的提取、鉴定及含量测定
• 1 材料
• 1.1 试验材料及试剂
• 1.2 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 青刺果总黄酮的提取
• 2.2 青刺果总黄酮的鉴定
• 2.3 青刺果总黄酮含量测定
• 2.3.1 标准溶液的配制
• 2.3.2 供试品溶液的配制
• 2.3.3 测定波长的选择
• 2.3.4 标准曲线的制备
• 2.3.5 精密度试验
• 2.3.6 显色稳定性试验
• 2.3.7 回收率试验
• 2.3.8 样品含量的测定
• 3 结果
• 3.1 颜色反应结果
• 3.2 测定波长的选择
• 3.3 标准曲线的制备
• 3.4 精密度试验
• 3.5 显色稳定性试验
• 3.6 回收率试验
• 3.7 含量测定结果
• 4 讨论
• 4.1 提取条件的确定
• 4.2 青刺果总黄酮的鉴定
• 4.3 青刺果总黄酮含量测定
• 第二章 青刺果总黄酮纯化工艺的选择
• 1.材料
• 1.1 试验材料及试剂
• 1.2 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 纯化方法
• 2.1.1 有机溶剂萃取法
• 2.1.2 碱溶酸沉法
• 2.1.3 结晶法
• 2.2 定性试验
• 2.2.1 薄层层析试验
• 2.2.1.1 对照品溶液及供试液的制备
• 2.2.1.2 薄层层析定性分析
• 2.2.2 显色反应
• 2.3 提取物中总黄酮含量测定
• 2.3.1 对照品溶液的配制
• 2.3.2 供试品溶液的制备
• 2.3.3 标准曲线的绘制
• 2.3.4 供试品中总黄酮的含量测定
• 3 结果
• 3.1 薄层层析检测结果
• 3.2 颜色反应结果
• 3.3 各样品中总黄酮含量及物理性状
• 4 讨论
• 第三章 青刺果总黄酮对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的降糖作用
• 1 材料
• 1.1 受试品及试剂
• 1.2 试验动物
• 2 方法
• 2.1 糖尿病小鼠模型的建立
• 2.2 动物分组及给药
• 2.3 标本采集和处理
• 2.4 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠体重的影响
• 3.2 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠血糖的影响
• 3.3 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠血脂的影响
• 3.4 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶的影响
• 3.5 青刺果总黄酮对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠尿素氮的影响
• 4 讨论
• 4.1 四氧嘧啶制备小鼠糖尿病模型的影响因素
• 4.2 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠体重的影响
• 4.3 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠血糖和血脂的影响
• 4.4 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠肝功能指标的影响
• 4.5 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠肾功能指标的影响
• 第四章 青刺果总黄酮对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠心、肝、肺、肾组织病理变化的影响
• 1 材料
• 1.1 受试品及试剂
• 1.2 试验动物
• 1.3 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 糖尿病小鼠模型的建立
• 2.2 动物分组及给药
• 2.3 标本采集和处理
• 2.4 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠心肌组织病理变化的影响
• 3.2 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠肝重、肝脏指数及肝组织病理变化的影响
• 3.2.1 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠肝重及肝脏指数的影响
• 3.2.2 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠肝组织病理变化的影响
• 3.3 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠肺组织病理变化的影响
• 3.3.1 HE染色
• 3.3.2 Gomori染色
• 3.4 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠肾重、肾脏指数及肾组织病理变化的影响
• 3.4.1 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠肾重及肾脏指数的影响
• 3.4.2 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠肾组织病理学变化的影响
• 3.4.2.1 HE染色
• 3.4.2.2 PAS染色
• 3.4.2.3 Gomori染色
• 3.4.2.4 电镜观察
• 4 讨论
• 4.1 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠心肌组织病理变化的影响
• 4.2 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠肝脏的影响
• 4.3 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠肺组织病理变化的影响
• 4.4 青刺果总黄酮对糖尿病小鼠肾脏的影响
• 第三部分 结论
• 参考文献
• 版图及说明
• 致谢
• 攻读硕士期间发表论文情况