黑孢漆斑菌产漆酶的研究

论文摘要

本文以漆斑菌胞外漆酶为对象,主要对漆斑菌之一——黑孢漆斑菌（Myrothecium melanosporum）产漆酶（Laccase, Lac）情况进行了系统的研究。本文比较研究了热变性法和冰浴法终止酶活反应对黑孢漆斑菌漆酶活性测定的影响,其结果显示：采用热变性法作为终止方法是可行的,相对于冰浴法,具有可靠,可重复,简便快捷的特点。对黑孢漆斑菌发酵产漆酶培养条件与培养基进行研究,以发酵液中黑孢漆斑菌胞外漆酶活性为衡量指标,通过正交试验,单因素分析,得出最佳培养条件为初始pH5.5,接种量7.5%,菌龄9天,摇床转速160r/min,装液量100ml,自然光照,28℃培养9天。优化培养条件下黑孢漆斑菌胞外漆酶活性是未优化条件下黑孢漆斑菌胞外漆酶活性的2.49倍。最佳培养基组成为2%葡萄糖,0.1%棉花,0.2%酒石酸铵,0.5%蛋白胨（浓度为质量百分比浓度）。优化培养基液体发酵液中黑孢漆斑菌漆酶活性是液体基础培养基的3.58倍,是优化培养条件下发酵培养的1.07倍。Cu2+、Zn2+、Mn2+、Fe2+四种金属离子均不同程度地对黑孢漆斑菌发酵产漆酶有一定影响。在浓度较低时,四种金属离子对黑孢漆斑菌产漆酶都有缓慢的促进作用,但超过一定浓度,促进就会转变为抑制作用。四种离子中,铜离子的浓度变化对黑孢漆斑菌产漆酶的活性影响最大,其次是锰离子。锌离子和亚铁离子的影响力相对较小。检测四种不同诱导剂在黑孢漆斑菌生长过程中产生的作用。香兰素、愈创木酚、阿魏酸和邻甲苯胺等四种诱导剂的具有诱导作用,但作用不明显。将培养所得的漆酶进行电泳实验,对培养所得漆酶的酶学性质进行初步的系统研究。由PAGE电泳酶谱推断,液体发酵培养过程中,产生的漆酶为单一酶。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 绪论
• 1.1 木质素降解的研究现状
• 1.2 木质素降解酶的应用
• 1.2.1 生物制浆
• 1.2.2 生物漂白
• 1.2.3 染料工业
• 1.2.4 褐煤的生物降解
• 1.2.5 环境保护
• 1.3 漆酶简介
• 1.3.1 漆酶的分布
• 1.3.2 漆酶的理化性质
• 1.3.3 漆酶的氧化还原电位与漆酶结构的关系
• 1.3.4 漆酶的催化机理
• 1.3.5 漆酶的研究进展
• 1.3.6 漆酶活性的测定
• 1.4 漆斑菌的研究进展
• 1.4.1 漆斑菌的种类
• 1.4.2 漆斑菌研究现状
• 1.5 本论文的立题依据、主要内容及意义
• 2 黑孢漆斑菌漆酶活力测定终止反应条件研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 菌种
• 2.1.2 主要生化试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.1.4 培养方法
• 2.1.5 黑孢漆斑菌漆酶活性测定终止方法研究
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 不同终止方法对ABTS溶液A420nm值的影响
• 2.2.2 不同终止方法对黑孢漆斑菌漆酶溶液A420nm值的影响
• 2.2.3 不同终止方法对黑孢漆斑菌漆酶酶活A420nm值的影响
• 2.3 讨论
• 3 黑孢漆斑菌产漆酶最佳培养条件研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 供试菌株
• 3.1.2 主要生化试剂
• 3.1.3 主要仪器
• 3.1.4 培养方法
• 3.1.5 黑孢漆斑菌漆酶活性生长曲线的绘制
• 3.1.6 培养条件优化试验
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 黑孢漆斑菌漆酶活性生长曲线的绘制
• 3.2.2 黑孢漆斑菌液体培养条件的优化
• 3.3 讨论
• 4 黑孢漆斑菌产漆酶最佳培养基研究
• 4.1 黑孢漆斑菌发酵产漆酶培养基的配方研究
• 4.1.1 材料与方法
• 4.1.2 结果与分析
• 4.2 黑孢漆斑菌发酵产漆酶培养基的浓度研究
• 4.2.1 方法
• 4.2.2 结果与分析
• 4.3 讨论
• 5 不同金属离子以及诱导剂对黑孢漆斑菌产漆酶的影响
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 供试菌株
• 5.1.2 主要生化试剂
• 5.1.3 主要仪器
• 5.1.4 培养方法
• 5.1.5 金属离子对黑孢漆斑菌漆酶活·性的影响试验
• 5.1.6 诱导剂对黑孢漆斑菌漆酶活性的影响试验
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 不同金属离子对黑孢漆斑菌漆酶活性的影响
• 5.2.2 不同诱导剂对黑孢漆斑菌漆酶活性的影响
• 5.3 讨论
• 6 黑孢漆斑菌胞外漆酶聚丙烯酰胺凝胶电泳实验
• 6.1 材料与方法
• 6.1.1 供试菌株
• 6.1.2 主要生化试剂
• 6.1.3 主要仪器
• 6.1.4 培养
• 6.1.5 实验方法
• 6.2 结果与分析
• 6.2.1 蛋白质标准曲线
• 6.2.2 活性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳结果
• 6.3 讨论
• 7 结论与展望
• 7.1 结论
• 7.2 展望
• 7.3 创新点
• 参考文献
• 附录A
• 致谢