连翘木脂素的分离制备工艺及其药效研究

论文摘要

中药现代化研究已成为目前医药领域的热点研究课题，采用现代化手段从中药分离制备活性成分是中药现代化研究的重要内容。本论文立足于药效，采用微波-半仿生法提取、大孔吸附树脂、柱层析法等中药现代化技术，首次系统地研究了连翘木脂素类成分的分离制备工艺，得到了易于工业化的工艺路线和条件参数；通过体外实验和动物体内实验研究探索了连翘木脂素抗衰老抗氧化、对脑损伤保护的生物学活性，取得了一系列有意义的成果。1．实验研究了连翘中木脂素类成分的不同提取工艺。采用传统的热浸提工艺提取连翘木脂素类成分，确定了提取工艺的优化参数。热浸提工艺提取过程平稳，设备要求不高，适合目前多数中药制药厂使用。研究了优化条件下的热浸提取动力学，结果显示提取过程是内扩散控制过程，提取表观活化能为19．74 kJ／mol，提取动力学方程为：采用微波-半仿生法模拟人体内消化道环境提取连翘木脂素类成分，实验显示证明微波-半仿生法提取效率高，优化条件下20分钟内通过两次提取，连翘木脂素的提取率高达87．5％，能耗低，前景广阔，产品的生物利用率得到提高。2．对连翘木脂素类成分进行了纯化研究。采用溶剂萃取-大孔吸附树脂-柱层析工艺纯化制备得到了纯度高达93．5％的精制连翘木脂素产品。采用大孔吸附树脂纯化连翘木脂素类成分，筛选出X-5树脂用于纯化，按照恒温25℃，上柱溶液木脂素类成分含量约为1000mg／L，吸附流速2BV／h，共吸附8 BV的上柱溶液；解吸时先用水淋洗，再用80％乙醇解吸，控制脱附流速为1BV／h，脱附剂的用量为3BV／批的优化工艺可以制备得到纯度达到82．5％的连翘木脂素产品，该纯化工艺过程简便，溶剂使用量少，对环境污染少，降低了成本，适合工业化扩大生产。通过对X-5树脂吸附行为的研究，确定X-5树脂吸附连翘木脂素类化合物过程主要是单分子的物理吸附，是放热的自发吸附过程，低温有利于树脂的吸附。Langmuir吸附等温方程能够很好地模拟X-5树脂等温吸附过程。3．研究了连翘提取物的抗氧化作用。通过研究得到连翘提取物的抗氧化活性强于化学合成氧化剂丁基羟基茴香醚，连翘提取物可以作为新型抗氧化剂加以开发。首次研究了连翘木脂素抗衰老抗氧化活性，体外实验显示连翘木脂素类化合物能够有效清除各种致衰老的自由基和成分。4．研究了连翘木脂素的对脑损伤保护的生物学活性。采用脑缺血再灌模型，通过比较连翘木脂素治疗组、对照组、假手术组实验动物小鼠的神经行为，分析血浆中超氧化物歧化酶、丙二醛、降钙素基因相关肽等成分的含量，观察小鼠海马CA1区中ET3和GFAP阳性细胞，证实连翘木脂素能减轻脂质过氧化反应、降低脑缺血再灌注海马区内皮素（ET）的表达、减缓蛋白质变性失活和膜屏障功能受损、减轻脑缺血再灌所致的神经损伤和脑神经元细胞死亡程度，具有脑缺血保护的生物学活性。研究结果提示连翘木脂素能够清除脑缺血损伤时产生的大量自由基是其具有此生物学活性的原因。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 连翘的生药学形态和化学成分
• 1.1.1 连翘的生药学形态
• 1.1.2 连翘的化学成分
• 1.2 连翘的药理作用
• 1.2.1 抗菌作用
• 1.2.2 抗炎作用
• 1.2.3 抗内毒素作用
• 1.2.4 解热作用
• 1.2.5 抗病毒作用
• 1.2.6 抗衰老抗氧化作用
• 1.2.7 抑制磷酸二酯酶的作用
• 1.2.8 抑制弹性蛋白酶活力作用
• 1.2.9 保肝护肝作用
• 1.2.10 调节心血管系统作用
• 1.2.11 镇痛作用
• 1.2.12 镇吐作用
• 1.2.13 毒副作用
• 1.3 连翘活性成分的分离纯化研究现状
• 1.3.1 挥发油的分离纯化工艺
• 1.3.2 黄酮的分离纯化工艺
• 1.3.3 熊果酸的分离纯化工艺
• 1.3.4 连翘酯甙的分离纯化工艺
• 1.3.5 连翘甙的分离纯化工艺
• 1.4 研究课题的目的、意义及工作内容
• 1.4.1 研究课题的意义
• 1.4.2 研究课题的目的
• 1.4.3 研究课题的工作内容及特点
• 第二章 连翘木脂素类成分的提取工艺研究
• 2.1 引言
• 2.1.1 微波辅助提取技术
• 2.1.2 半仿生提取技术
• 2.2 实验仪器、材料与试剂
• 2.2.1 实验仪器
• 2.2.2 材料与试剂
• 2.3 分光光度法测定连翘木脂素类成分
• 2.3.1 实验部分
• 2.3.2 方法学研究
• 2.3.3 连翘木脂素类成分含量的测定
• 2.4 热浸法提取连翘木脂素类成分
• 2.4.1 实验部分
• 2.4.2 热浸提取工艺
• 2.4.3 热浸提取工艺动力学研究
• 2.5 微波-半仿生法提取连翘木脂素类成分
• 2.5.1 实验部分
• 2.5.2 微波-半仿生法提取工艺
• 2.6 本章小结
• 第三章 连翘木脂素类成分的纯化工艺研究
• 3.1 引言
• 3.1.1 溶剂萃取
• 3.1.2 大孔吸附树脂吸附分离
• 3.1.3 柱层析分离
• 3.1.4 连翘木脂素类成分的纯化工艺路线
• 3.2 实验仪器、材料与试剂
• 3.2.1 实验仪器
• 3.2.2 材料与试剂
• 3.3 连翘木脂素类成分溶剂萃取工艺研究
• 3.3.1 实验部分
• 3.3.2 溶剂萃取纯化工艺
• 3.4 连翘木脂素类成分大孔吸附树脂纯化工艺研究
• 3.4.1 实验部分
• 3.4.2 大孔吸附树脂纯化工艺
• 3.4.3 X-5树脂吸附行为研究
• 3.5 连翘木脂素类成分柱层析纯化工艺研究
• 3.5.1 实验部分
• 3.5.2 柱层析纯化工艺
• 3.6 本章小结
• 第四章 连翘提取物及其木脂素类成分抗衰老抗氧化活性研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验仪器、材料与试剂
• 4.2.1 实验仪器
• 4.2.2 材料与试剂
• 4.3 连翘提取物抗氧化性研究
• 4.3.1 连翘提取物抑制油脂氧化
• 4.3.2 连翘提取物清除羟基自由基（OH·）
• 4.3.3 连翘提取物清除超氧阴离子自由基（O-2·）
• 4.4 连翘木脂素清除致衰老自由基和成分研究
• 4.4.1 实验部分
• 4.4.2 连翘木脂素类成分清除致衰老自由基
• 4.5 本章小结
• 第五章 连翘木脂素类化合物的生物活性研究
• 5.1 引言
• 5.2 实验仪器、材料与试剂
• 5.2.1 实验仪器
• 5.2.2 材料与试剂
• 5.3 连翘木脂素对小鼠脑缺血再灌氧自由基损伤的保护作用和降钙素基因相关肽影响的研究
• 5.3.1 实验部分
• 5.3.2 结果与讨论
• 5.3.3 结论
• 5.4 连翘木脂素对小鼠脑缺血再灌海马CA1区内皮素-3表达影响的研究
• 5.4.1 实验部分
• 5.4.2 结果与讨论
• 5.4.3 结论
• 5.5 本章小结
• 第六章 结语
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 发表论文和科研情况