hTRAIL对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的影响

论文摘要

背景：类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）的病理特征主要表现为滑膜细胞的增殖与炎性细胞的浸润，导致滑膜增厚、骨与软骨组织的侵蚀破坏。越来越多的研究表明，RA滑膜成纤维细胞（rheumatoid arthritis synovial fibroblasts, RASFs）的凋亡缺陷是其重要发病机制之一。因此诱导RASFs凋亡、抑制滑膜组织增殖成为治疗RA的关键。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF-related apoptosis inducingligand, TRAIL）是近年来新发现的凋亡诱导配体，它具有强大的诱导肿瘤细胞凋亡的能力，但对正常细胞基本没有影响。有研究发现，在IL-1β诱导的兔膝骨关节炎模型中，通过对兔关节腔内注入带有TRAIL基因的腺病毒可使TRAIL介导的炎性滑膜组织凋亡率升高。本实验拟通过重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（human TNF-related apoptosis inducing ligand,hTRAIL）蛋白体外诱导RASFs的凋亡，以期寻找RA新的治疗方法。目的：探讨重组hTRAIL蛋白对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RASFs）凋亡的作用。方法：1.获取类风湿关节炎患者的滑膜组织，用酶消化法分离培养原代滑膜细胞。2.滑膜细胞的鉴定：滑膜细胞传至第4代，倒置显微镜下观察滑膜细胞形态，II型胶原鉴定RASFs。3.细胞增殖实验：不同终浓度hTRAIL干预滑膜细胞，继续培养不同时间后，MTT法检测其对RASFs增殖的抑制作用。4.流式细胞术：设对照组（仅加培养基）和加药组（加入含不同浓度hTRAIL的含药培养基），干预对数生长期细胞4小时后,收集细胞，上机检测RASFs的凋亡情况。实验重复三次取平均值。5. RT-PCR：设对照组（仅加培养基）和加药组（加入含不同浓度hTRAIL的含药培养基），干预对数生长期细胞4小时后,进行逆转录-聚合酶链（RT-PCR）反应，软件分析结果。实验重复三次，取平均值。6. Western bloting：hTRAIL干预对数生长期细胞4小时后,进行Western bloting实验，用凝胶图像处理系统分析实验结果。实验重复三次，取平均值。结果：1. hTRAIL对RASFs生长的影响：用不同浓度的hTRAIL处理RASFs4h、12h、24h、48h后，表现出不同程度的细胞生长抑制作用，各组与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.01）。2. RASFs对hTRAIL诱导的细胞凋亡敏感。3.与对照组比较，RASFs DR5受体mRNA的表达增高，差异有统计学意义（P<0.01）。4.与对照组比较，RASFs DR5受体蛋白的表达增高，差异有统计学意义（P<0.01）。结论：hTRAIL可体外诱导RASFs凋亡。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录 A 中英文术语缩略语对照表
• 附录 B 主要试剂配制方法
• 附录 C 综述
• 参考文献