头孢妥仑跨膜转运吸收机制的体内外研究

论文摘要

目的:头孢妥仑（ cefditoren, CDTR）是前体药物头孢妥仑匹酯（CDTR-PI）经口服吸收在肠壁酯酶的作用下水解生成,从而发挥抗菌作用。本实验主要研究大鼠体内CDTR的主要排泄途径以及体内体外实验研究其跨膜转运吸收及其机制,从而考察CDTR是否为PEPTs的底物。方法:采用高效液相色谱法（HPLC）测定血浆、尿液、胆汁、Krebs-Ringer缓冲液（KRB）、细胞裂解液样品中CDTR的药物浓度。流动相为1‰醋酸胺:甲醇（67:33）,内标为4-二甲氨基安替比林,流速为1mL/min,UV检测波长295nm。体内实验中,麻醉大鼠分别行胆管插管和膀胱插管手术,颈静脉给药,分别于各时间点收集胆汁和尿液,经处理后HPLC测定CDTR药物浓度,计算胆汁中和尿液中经时累积药物排泄量。大鼠静脉同时给予PEPTs抑制剂甘氨酰肌氨酸（glycylsarcosine,Gly-Sar）测定其对大鼠体内CDTR排泄的影响。应用大鼠空肠灌流模型,考察Gly-Sar以及　2受体激动剂可乐定（clonidine）在该模型中对CDTR经肠道转运吸收入血的影响。制备大鼠翻转肠样品,测定离体肠管对药物浓度依赖性摄取以及Gly-Sar对离体肠管摄取CDTR的影响。将于24孔板培养15天的Caco-2细胞用于药物摄取实验,分别考察pH值、时间、温度、浓度以及Gly-Sar对CDTR在该模型中摄取的影响。结果:HPLC方法学验证表明血浆、胆汁、尿液、KRB缓冲液、细胞裂解液样品中干扰峰对CDTR峰无干扰,CDTR保留时间为21.2min,内标保留时间为22.0min,二者分离良好。稳定性实验测得CDTR在HBSS和KRB缓冲液中37℃放置至少60min内稳定。大鼠静脉给予0.5mg/kg的CDTR,6小时内大约34%给药量的CDTR经胆汁排泄,约4%给药量的CDTR经尿液排泄。当静脉同时给予CDTR和Gly-Sar,与单独给予CDTR相比,胆汁中CDTR累积排泄量无显著性差异,但是尿液中药物累积排泄量则明显增加从3.64%增加到10.28% ,肾脏清除率从1.34mL/min增加到4.16mL/min。在大鼠空肠灌流实验中,50mM Gly-Sar竞争性的抑制了0.1 mM CDTR经小肠的转运吸收。灌流15min,30 min,60 min后,加入Gly-Sar组的门脉血浆药物浓度（0.19μg/mL,0.28μg/mL,0.46μg/mL）与对照组（0.52μg/mL,0.98μg/mL,1.56μg/mL）相比显著性降低。当于灌流前15min静脉推注400μg/kg的可乐定,可以显著的增加1mM CDTR经空肠灌流模型转运入血的量,从而提高门脉的血浆药物浓度,灌流60min的门脉血药浓度与对照组相比,从1.03μg/mL增加到1.50μg/mL。当于灌流液中同时加入50mM Gly-Sar后,可抵消可乐定诱导的CDTR在空肠灌流模型中转运吸收增加的作用。在外翻肠囊模型实验中,CDTR的浓度依赖性摄取存在饱和现象,当CDTR的浓度达到5mM时浆膜侧药物浓度达到饱和（28.93nmoL/mL）。与空肠灌流实验相似,200mM Gly-Sar显著抑制了CDTR在翻转肠模型中的摄取。在Caco-2细胞模型摄取实验中,Caco-2细胞对CDTR的摄取在60min内随摄取时间推移近似线性增加,60min内未见摄取饱和现象,Gly-Sar显著的抑制各时间点Caco-2细胞对CDTR的摄取。浓度依赖性特异性摄取部分是一条饱和曲线,计算Km=1.095mM, Vmax=1.115nmol/mg protein/30min。4°C条件下CDTR的摄取与37°C条件下的摄取相比显著降低。另外pH值也显著的影响Caco-2细胞对CDTR的摄取,在pH=6.0摄取量最大,在pH=8.5时摄取量最小。结论:CDTR主要经过胆汁排泄,少量经肾脏排泄,静脉给药6小时内约40%给药剂量的药物经胆汁及肾脏排泄。体内实验以及大鼠空肠灌流模型,外翻肠囊模型,Caco-2细胞模型实验中,PEPTs的特异性抑制剂Gly-Sar以及PEPTs的调节剂可乐定显著的影响CDTR经肠道的转运吸收以及肾脏的排泄,因此CDTR是H+协同肽转运蛋白PEPTs的底物之一。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料和方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢