丹参素对肝星状细胞中PI3-K/Akt信号通路的影响

论文摘要

目的:分离获取高产量、高活性、高纯度的肝星状细胞。方法:用原位循环灌流法,密度梯度离心法分离纯化大鼠的肝星状细胞,用含胎牛血清的DMEM培养液培养细胞并传代。结果:肝星状细胞得率为3×107个/鼠,纯度大于97%,存活率大于92%。结论:分离出的大鼠肝星状细胞产量高、活性好、纯度高。目的:研究丹参素对肝星状细胞蛋白激酶B（Akt）和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达的影响,探讨丹参素抗肝纤维化的机制。方法:采用原位循环灌流法提取Wistar大鼠的肝星状细胞,在肝星状细胞培养板内分别加入不同浓度的丹参素和渥曼青霉素在体外培养24小时后,用MTT法观察丹参素以及渥曼青霉素对肝星状细胞增殖的抑制作用。用流式细胞仪观察丹参素和渥曼青霉素对肝星状细胞周期的影响。Western Blot方法检测不同浓度丹参素和渥曼青霉素作用后的肝星状细胞中Akt和p-Akt的表达情况。结果:MTT检测表明浓度为0.0625mmol/L,0.125mmol/L,0.25mmol/L的丹参素对肝星状细胞增殖的抑制作用依次增强,浓度为20nmol/L,40 nmol/L,60 nmol/L的渥曼青霉素对肝星状细胞增殖的抑制作用也依次增强。流式细胞仪检测结果显示丹参素和渥曼青霉素使G1期肝星状细胞增多,S期肝星状细胞减少,肝星状细胞停滞于G1期。Western blot检测出丹参素和渥曼青霉素对肝星状细胞中Akt蛋白的表达没有明显影响,但是不同浓度的丹参素和渥曼青霉素作用于肝星状细胞24小时后,细胞中有p-Akt的表达,且随药物浓度增加表达逐渐减弱。结论:丹参素和渥曼青霉素对肝星状细胞增殖的抑制作用与其抑制p-Akt的表达有关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 大鼠肝星状细胞（HSC）的分离和培养
• 1. 材料和方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 第二部分 丹参素对肝星状细胞中P13-K/AKT 信号通路的影响
• 1. 材料和方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 附图
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士研究生期间发表的学术论文