尼妥珠单抗联合顺铂或氟尿嘧啶对人食管鳞癌细胞体外生长的影响

论文摘要

背景表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）的过表达与肿瘤的恶性程度和患者预后有关。据研究,EGFR在多种人类肿瘤中过表达,其中食管鳞癌表达率达30-90%。尼妥珠单抗（nimotuzumab, h-R3）是针对EGFR的人源化单克隆抗体,已在头颈部肿瘤及脑瘤的临床试验中取得了不错的治疗效果,并且未出现其它抗EGFR单克隆抗体引起的严重不良反应。而尼妥珠单抗在食管癌应用方面鲜少研究。目的研究h-R3与细胞毒性药物顺铂（cisplatin, DDP）、氟尿嘧啶（fluorouracil,5-FU）联合对两种EGFR表达情况不同的人食管鳞癌细胞株EC1、EC9706体外生长的影响及可能机制。方法1.免疫组织化学法检测人食管鳞癌细胞株EC1、EC9706的EGFR表达情况。2.应用MTT法分别检测DDP、5-FU单药或与h-R3联合应用对EC1和EC9706细胞增殖的抑制作用。h-R3单药时药物浓度设为：12.5、25、50、100、200、400μg/ml6个浓度组；DDP药物浓度设为：0.25、0.5、1、1.5、2、2.5μg/ml6个浓度组；5-FU药物浓度设为：0.5、1、2、4、6、8μg/ml6个浓度组；计算DDP和5-FU单药对细胞的生长抑制率,选30%生长抑制率的药物浓度（30%inhibitive concentration, IC30）作为后续联合组实验的药物浓度,h-R3联合化疗药物时药物浓度设为100μg/ml,分组为：空白对照组、h-R3单药组、DDP单药组、5-FU单药组、h-R3联合DDP组、h-R3联合5-FU组,药物作用48小时后检测抑制细胞增殖的作用,根据OD值计算细胞生长抑制率和两药联合的q值。3.流式细胞仪检测100μg/ml h-R3作用48小时后对细胞周期的影响。4.流式细胞仪和TUNEL法检测单药或联合用药对细胞凋亡的影响。结果1.EGFR主要在细胞膜和细胞质中表达,在EC9706呈高水平表达,EC1呈低水平表达,表达率分别为91.22+4.65%和22.45±2.54%。2.单用h-R3对EC1和EC9706细胞增殖抑制作用较低,处理48h后EC1和EC9706细胞生长的最高抑制率仅分别为10.10+0.58%和27.84±2.42%,两者比较差异具有统计学意义（P<0.01）。单药DDP和5-FU对EC1和EC9706两种细胞均具有明显的抑制增殖作用,DDP处理EC1和EC970648h后IC30约为0.5μg/ml,5-FU处理48h后的IC30约为1μg/ml。h-R3联合化疗药物组处理EC9706细胞的生长抑制率与单独化疗组比较差异有统计学意义（P<0.01）,0.85<q<1.15,在EC1差异无统计学意义（P>0.05）。3.流式细胞仪检测细胞周期,结果显示单药h-R3可诱导EC9706细胞周期G1期阻滞,与空白对照组相比差异具有统计学意义（P<0.01）,EC1则未见明显的细胞周期改变（P>0.05）。4.流式细胞仪及TUNEL法检测凋亡结果显示单药h-R3诱导EC9706细胞的凋亡率,与空白对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）,EC1细胞则无（P>0.05）；单药DDP、5-FU诱导两种细胞的凋亡率与空白对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）；h-R3联合化疗药物组处理EC9706细胞的凋亡率与单独化疗组比较差异有统计学意义（P<0.05）,在EC1差异无统计学意义（P>0.05）；h-R3联合化疗药物组处理EC9706细胞的凋亡率与单独处理组的细胞凋亡率之和相比差异无统计学意义（P>0.05）。结论1.h-R3的抗肿瘤作用与细胞EGFR的表达水平有关。2.h-R3单独应用在体外对EGFR高表达的人食管鳞癌EC9706细胞有微弱的抑制作用,能够引起G1期细胞阻滞,与DDP或5-FU联合应用作用为相加。3.h-R3体外对EGFR低表达人食管鳞癌EC1细胞无论单用或是联合化疗药物均无明显作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1 实验材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 细胞系及培养条件
• 1.1.2 主要仪器
• 1.1.3 主要试剂
• 1.1.4 培养基和常用实验试剂制备
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 细胞培养
• 1.2.2 免疫组织化学法检测EGFR的表达
• 1.2.3 MTT法检测对食管癌细胞的抑制情况
• 1.2.4 流式细胞仪分析细胞周期及凋亡
• 1.2.5 TUNEL法测细胞凋亡
• 1.3 统计学分析
• 2 结果
• 2.1 免疫组织化学法检测细胞表面EGFR的表达情况
• 2.2 MTT法实验结果
• 2.2.1 三药单独处理后人食管鳞癌细胞的生长抑制情况
• 2.2.2 联合处理对人食管癌细胞的生长抑制情况
• 2.3 流式细胞仪分析细胞周期
• 2.4 流式细胞仪分析细胞凋亡
• 2.5 TUNEL检测各组细胞凋亡结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 附图
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表文章情况
• 致谢
• 个人简历