新型高效IDO抑制剂的筛选及其机制研究

论文摘要

吲哚胺2,3双加氧酶（Indoleamine 2,3-Dioxygenase, IDO）是色氨酸犬尿氨酸途径（kynurenine pathway, KP）代谢的限速酶,催化色氨酸分解代谢产生L-犬尿氨酸,喹啉酸等具有细胞毒性的代谢产物。研究发现IDO在阿尔茨海默病（AD）的发病及肿瘤免疫逃逸的过程中起了重要的作用。IDO抑制剂有望成为治疗阿尔茨海默病和肿瘤免疫逃逸的新型药物。黄连解毒汤（OGT）是一种传统的中药方剂,在临床上有广泛的用途。对AD大鼠模型研究发现,黄连解毒汤可以改善AD引起的学习及记忆能力下降。黄连解毒汤可以缓解胆碱能神经功能障碍,减少氧化应激,但其提高认知能力的确切机制尚不清楚。4-芳基-1H-1,2,3-三氮唑化合物具有广泛的生物活性,其中的五元杂环作为药效基团具有高活性、低毒性等诸多优点,因而己被广泛用于药物化学。本研究发现在体外实验中黄连解毒汤对重组人IDO具有显著的抑制作用,其4种主要单体成分小檗碱,巴马汀,药根碱,黄岑素是高效的IDO的抑制剂,对细胞内高表达的IDO同样具有抑制效果,证实黄连解毒汤可能通过抑制IDO的活性达到治疗AD的作用。4-芳基-1H-1,2,3-三氮唑衍生物4-苯基-1H-1,2,3-三氮唑,4-（2-氯）-苯基-1H-1,2,3-三氮唑,4-（2-溴）-苯基-1H-1,2,3-三氮唑具有较高的IDO抑制活性,在混合淋巴细胞反应体系中（Mixed Lymphocyte Reaction; MLR）中可增强LLC细胞对T淋巴细胞的刺激。本研究阐明了黄连解毒汤治疗AD的机制并且实验中所发现的7种IDO抑制剂与研究中普遍使用的IDO抑制剂1-甲基色氨酸（1-MT）相比,在体外实验及细胞水平上都具有更好的抑制效果,为进一步寻找高效IDO抑制剂提供了新的方向。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 综述
• 材料与仪器
• 一. 材料与试剂
• 二. 实验仪器
• 实验方法
• 一. 候选化合物制备
• 1.1 天然来源的候选化合物
• 1.2 有机合成的候选化合物
• 二. 重组人IDO的表达与纯化
• 2.1 重组质粒的扩增及鉴定
• 2.2 重组人IDO的表达
• 2.3 重组人IDO的纯化
• 2.4 重组人IDO的鉴定
• 三. IDO抑制剂的生物活性测定
• 3.1 抑制剂活性检测
• 3.2 抑制剂类型测定
• 50值测定'>3.3 抑制常数Ki及IG₅₀值测定
• 3.4 细胞水平抑制剂活性测定
• 3.5 单向淋巴细胞混合反应
• 实验结果
• 1 重组人IDO的表达与纯化
• 2 体外抑制剂筛选体系的建立
• 3 天然来源IDO抑制剂的筛选
• 3.1 黄连解毒汤抑制重组人IDO
• 3.2 黄连解毒汤单体成分抑制重组人IDO
• 50值'>3.3 OGT主要单体成分的Ki值及IG₅₀值
• 3.4 OGT主要单体成分细胞水平抑制效果
• 4 有机合成化合物IDO抑制的筛选
• 4.1 4-芳基-1H-1,2,3-三氮唑衍生物抑制重组人IDO
• 4.2 4-苯基-1H-1,2,3-三氮唑衍生物抑制重组人IDO
• 4.3 4-苯基-1H-1,2,3-三氮唑衍生物细胞水平抑制效果
• 4.4 4-苯基-1H-1,2,3-三氮唑衍生物对T淋巴细胞增殖影响
• 实验讨论
• 参考文献
• 致谢
• 附录