论文摘要
目的:（1）探讨两性霉素B脂质体（L-AmB）与两性霉素B（AmB）抗菌活性差别及其相关性。（2）建立流式细胞术（FCM）快速检测L-AmB对念珠菌的最低抑菌浓度（MIC）的方法,双盲测定21株念珠菌的MIC,与常规药敏试验结果进行比较,探讨该方法应用价值。方法（1）参照美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的M27-A2方案常量稀释法,体外测定AmB及L-AmB对20株念珠菌临床分离株及1株标准菌株的MIC,比较两药的MIC差别并用SPSS10.0统计软件分析两药MIC值相关性。（2）选用L-AmB为试验药物,以碘化丙啶（PI）为荧光染料,采用流式细胞术,测定菌液平均荧光强度（MFI）,根据药物作用前后菌液MFI值的变化程度,按照设定的判断标准,判定受试菌株的MIC;在方法学建立过程中对PI染液浓度、染色方法、药物作用时间（孵育时间）及判断标准进行了初步探讨,确定最佳实验条件及判断标准,优化试验方法,建立FCM方法学,双盲测定1株标准菌株及20株临床分离株MIC,并将结果与M27-A2常量法进行比较。结果（1）L-AmB对念珠菌MIC与AmB相比在+1、+2个稀释度的符合率分别为52.4%（11/21）、23.8%（5/21）,多数L-AmB的MIC值要高于AMB,平均增加0.82个稀释度;SPSS10.0统计软件等级相关分析显示两药MIC值有相关性（r=0.643,p<0.01）。（2）PI染色终浓度为1.25mg/L时,染色效果最好,死细胞对照管与活细胞对照的菌液MFI值差别（差值为8.9）最明显, PI终浓度为10、25、50、75、100mg/L染色时,在FS/SS双参数图中显示活细胞碎裂成碎片,发生碎裂的细胞数量随着PI浓度的增加而增加;去除药物染色、不去除药物染色其药物试验管菌液MFI值比活细胞对照管的增加程度分别12.5%～94.6%、-3.8%～12.5%,去初药物的染色效果较好,不去除药物的染色效果较差;药物作用1小时、2小时、3小时、4小时的菌液MFI值比活细胞对照管增加程度分别为-5.2%～19.2%、-3.6%～21.4%、7.0%～59.7%、12.5%～87.5%,3小时的孵育时间较为理想;以MFI值大于活细胞对照管的50%的判断标准得出结果与M27-A2常量法符合程度较高,确定50%判断标准为本次试验最佳判断标准。FCM方法测得L-AmB对21株念珠菌MIC值与M27-A2方法相比在±1、±2、±3个稀释度内的符合率分别为61.9%（13/21）、85.7%（18/21）、95.2%（20/21）。结论（1）本次研究结果显示L-AmB对念珠菌的MIC与AmB有相关性（r=0.643,p<0.01）,①该结果表明L-AmB抗念珠菌与AmB相关;②该结果为进一步通过AmB敏感性折点浓度（1mg/L）推测和建议L-AmB的折点提供分析依据;结合本次试验结果,即L-AmB的MIC值平均要高于AmB 0.82（接近于1）个稀释度,推测L-AmB念珠菌敏感性折点浓度为2mg/L左右,但是真正的折点还有待于大量菌株试验进一步研究,并结合临床疗效对其折点进行评价。（2）本研究通过对FCM方法的试验条件和影响因素进行初步探讨,确定最佳试验条件和判断标准,成功建立FCM方法测定L-AmB对念珠菌MIC;与M27-A2常量法相比,该方法测得的结果与M27-A2常量法相比在±3个稀释度内的符合率为95.2%（20/21）,而且该方法具有快速、敏感、精确等优点。试验结果表明高浓度的PI（10～100mg/L）能够使念珠菌细胞碎裂成碎片;在染色方法上,建议去除药物后再进行染色。
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