论文题目: 土槿皮乙酸诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 药理学
作者: 龚显峰
导师: 王敏伟,池岛乔
关键词: 土槿皮乙酸,凋亡,家族,家族,家族
文献来源: 沈阳药科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 土槿皮乙酸是从松科植物金钱松的根皮中分离的二萜酸，具有抗真菌、抗肿瘤、抗生育等作用。本文对土槿皮乙酸体外抗肿瘤活性进行了较为系统的研究，主要阐述了土槿皮乙酸在两种肿瘤细胞：人宫颈癌HeLa细胞和人黑色素瘤A375-S2细胞中诱导细胞死亡的机制。 实验结果表明，土槿皮乙酸对HeLa细胞和A375-S2细胞有明显的细胞毒活性，抑制细胞生长呈明显的时间和剂量依赖性。形态学方法、核荧光染色、脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)及DNA片段化分析实验证实了土槿皮乙酸诱导HeLa细胞和A375-S2细胞死亡机制为诱导细胞凋亡。 土槿皮乙酸5μM作用于HeLa细胞后，caspase-3的酶原被降解，caspase-3底物ICAD(inhibitor of caspase activated DNase)和PARP(poly-(ADP-ribose)polymerase)降解，caspase-3的抑制剂可部分抑制土槿皮乙酸诱导的细胞死亡，表明土槿皮乙酸诱导HeLa细胞凋亡时激活了caspase-3。促凋亡蛋白Bax表达增加，抑凋亡蛋白Bcl-2表达降低，但抑凋亡蛋白Bcl-X_L表达不变。Bcl-2/Bax的比率降低，从而诱导细胞凋亡。土槿皮乙酸5μM作用24h后即可见p53表达增加，在36h达到峰值。丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)属于一种Ser/Thr蛋白激酶，可在多种不同的信号转导途径中发挥作用。土槿皮乙酸抑制磷酸化ERK(p-ERK)的表达，增加磷酸化JNK(p-JNK)的表达，而对磷酸化p38(p-p38)的表达没有影响。JNK MAPK抑制剂SP600125对土槿皮乙酸诱导的HeLa凋亡有明显的抑制作用。SP600125预处理后可部分抑制土槿皮乙酸诱导的DNA片段化，明显逆转土槿皮乙酸诱导的p53表达增加，并逆转土槿皮乙酸对p-ERK表达的抑制作用。土槿皮乙酸可诱导PKC活力增加，PKC抑制剂星形孢菌素、核因子-κB(NF-κB)抑制剂PDTC、酪氨酸激酶抑制剂genistein和Ras抑制剂manumycin A明显抑制土槿皮乙酸诱导的HeLa细胞死亡。
论文目录:
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英文摘要
第一章 绪论
第一节 抗肿瘤药物研究进展
第二节 细胞凋亡及分子机制研究进展
一、细胞凋亡的特征
二、细胞凋亡的一些调控因素
1.Caspase蛋白酶与细胞凋亡
2.Bcl-2家族成员在细胞凋亡中的作用
3.MAPK家族与细胞凋亡
4.p53基因与细胞凋亡
三、细胞凋亡的信号转导途径
1.死亡受体介导的凋亡通路
2.线粒体途径
第三节 土槿皮乙酸药理学研究概述
1.抗真菌作用
2.抗肿瘤作用
3.抗生育作用
4.抗血管生成作用
5.激活过氧化物酶体增生物激活受体
参考文献
第二章 土槿皮乙酸诱导人宫颈癌HeLa细胞死亡机制研究
一、实验部分
1.实验材料
2.实验方法
二、实验结果
1.土槿皮乙酸诱导HeLa细胞死亡呈明显的时间和剂量依赖性
2.土槿皮乙酸对HeLa细胞集落形成的影响
3.Polymyxin B未影响土槿皮乙酸诱导的HeLa细胞死亡
4.土槿皮乙酸诱导HeLa细胞凋亡的形态学变化
5.DNA电泳观察
6.TUNEL检测土槿皮乙酸诱导HeLa细胞凋亡
7.Caspase-3对土槿皮乙酸诱导HeLa凋亡的作用
7.1 Caspase-3对土槿皮乙酸诱导HeLa凋亡的抑制作用
7.2 土槿皮乙酸对procaspase-3及caspase-3底物ICAD、PARP的降解
8.土槿皮乙酸对Bax,Bcl-2和Bcl-X_L表达的影响
9.MAPK家族成员在土槿皮乙酸诱导HeLa细胞凋亡中的作用
10.SP600125对土槿皮乙酸诱导的细胞死亡的影响
11.PKC对土槿皮乙酸诱导的细胞凋亡的影响
12.土槿皮乙酸诱导HeLa细胞凋亡激活了NF-κB
13.Genistein及manumycin A对土槿皮乙酸诱导细胞死亡的影响
14.土槿皮乙酸和5-FU,ActD和Taxol的比较
三、讨论
四、小结
参考文献
第三章 土槿皮乙酸诱导人黑色素瘤A375-S2细胞死亡机制研究
一、实验部分
1.实验材料
2.实验方法
二、实验结果
1.土槿皮乙酸诱导A375-S2细胞死亡呈明显的时间和剂量依赖性
2.土槿皮乙酸诱导A375-S2细胞凋亡的形态学变化
3.DNA电泳观察
4.Caspase-3抑制剂对土槿皮乙酸诱导A375-S2凋亡的抑制作用
5.土槿皮乙酸诱导ICAD和PARP的降解
6.土槿皮乙酸对Bax,Bcl-2和Bcl-X_L表达的影响
7.MAPK家族成员在土槿皮乙酸诱导A375-S2细胞凋亡中的作用
8.土槿皮乙酸对p53的表达的影响
9.土槿皮乙酸对A375-S2细胞的周期阻滞作用
10.PKC对土槿皮乙酸诱导A375-S2细胞凋亡的作用
三、讨论
四、小结
参考文献
缩略语
致谢
附录
发布时间: 2006-11-27
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