选择性阻断KIRs抑制性受体调节NK细胞杀伤功能的实验研究

论文摘要

自然杀伤细胞（natural killer cells，NK cells）属非特异性免疫细胞，是人体细胞免疫的重要组成部分。特别是对病毒及肿瘤细胞具有杀伤活性，而对宿主本身的正常细胞不具有杀伤作用。NK细胞主要通过对“自我”和“非我”的准确识别发挥免疫保护作用。近年来研究发现NK细胞活化是通过其表面功能不同的受体发挥作用：（1）杀伤细胞活化受体；（2）杀伤细胞抑制受体。表面的杀伤抑制性受体（Killer cells inhibitory receptors，KIRs）是调节其杀伤活性的关键分子，为NK细胞的优势受体。目的：本课题初步探讨NK细胞通过抑制性受体与配体之间的相容性调节其细胞杀伤活性调节的作用和机理；封闭NK细胞的抑制性受体KIRs对于肿瘤细胞的体外杀伤活性的影响。方法：用单克隆抗体CD158a、CD158b封闭处理NK-92MI细胞后，与体外培养的K562细胞（NK细胞敏感细胞株）及Raji细胞（NK细胞不敏感细胞株）按不同的效靶比混合共同孵育。效靶比分别为5:1、10:1、20:1。同时每组效靶细胞均加设不使用CD158a、CD158b抗体封闭的对照组。应用流式细胞仪检测不同效靶比情况下NK-92MI细胞对靶细胞的体外杀伤活性。结果：实验所得，共同孵育4小时后的杀伤结果为最佳。NK-92MI杀伤作用随效靶比的增高而增强。经单克隆抗体CD158处理过的NK-92MI对K562和Raji细胞的杀伤活性均高于不应用单克隆抗体CD158处理过的对照组，且差异显著（P＜0.05）。用抗体封闭处理以后，NK-92MI细胞平均杀伤率提高了7％～8％。结论：KIRs受体封闭后的NK-92MI细胞与未处理的NK-92MI细胞比较，对肿瘤细胞的杀伤效果明显增强。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 1. 实验材料
• 1.1 细胞系
• 1.2 细胞培养常用试剂
• 1.3 用于PCR-SSP的试剂
• 1.4 用于流式细胞仪分析检测的试剂
• 1.5 主要试剂的配制
• 1.6 主要实验器材
• 1.7 细胞系特性
• 2. 实验方法
• 2.1 细胞培养
• 2.1.1 细胞培养条件
• 2.1.2 细胞冻存
• 2.1.3 细胞复苏
• 2.1.4 细胞计数
• 2.2 检测NK-92MI细胞的抑制性KIRs基因分型
• 2.2.1 基因组DNA提取
• 2.2.2 引物设计
• 2.2.3 PCR反应体系
• 2.2.4 PCR反应条件
• 2.2.5 电泳
• 2.3 NK-92MI细胞毒活性试验
• 2.3.1 靶细胞的荧光染色
• 2.3.2 KIRs受体的封闭
• 2.3.3 NK-92MI细胞杀伤试验
• 2.3.4 检测靶细胞的自然死亡率
• 2.4 流式细胞仪的检测和分机
• 2.4.1 流式细胞仪的检测方法
• 2.4.2 NK细胞杀伤率百分比公式
• 2.5 统计学分析方法
• 第三章 结果
• 1. NK-92MI细胞的抑制性KIRs基因分型
• 2. 检测NK细胞毒实验的最佳杀伤活性时间
• 3. 靶细胞的自然死亡率测定
• 4. 对照组NK-92MI的细胞毒测定
• 5. 实验组NK-92MI的细胞毒测定
• 6. NK-92MI对于靶细胞杀伤活性的流式细胞仪分析
• 7. NK-92MI对于两种靶细胞的杀伤活性比较
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 在读期间发表的论文
• 综述
• 致谢