禽脑脊髓炎病毒的鉴定与弱毒疫苗的研制

论文摘要

禽脑脊髓炎（Avian Encephalomyelitis; AE）又称流行性震颤（Epidemictremor）,是由禽脑脊髓炎病毒（AEV）引起的一种主要危害4 周龄以下雏鸡,以侵害中枢神经系统引起非化脓性脑炎为主要病理特征的病毒性传染病。具有突然出现和难以预测持续期等特点,能造成雏鸡的损失和母鸡产蛋率的下降,给养鸡业带来一定的威胁,成为当前世界上危害养禽业发展的主要疫病之一。目前该病尚无有效的药物治疗,预防主要靠疫苗。灭活苗的免疫抗体产生较晚,免疫期较短,成本较高,使用不方便等,限制了该苗的推广应用。而弱毒疫苗可以饮水的方式来免疫鸡群,使其子代雏鸡通过母源抗体而获得被动免疫,方便高效,在很多国家得到了广泛的应用。目前国内还没有弱毒疫苗研制成功的报道,所需弱毒疫苗都依靠进口。因此国内研制出自己的弱毒疫苗,不但可以有效控制禽脑脊髓炎的发生,还能为国家节省外汇开支,具有很大的经济效益。本实验在鉴定了自国内分离的禽脑脊髓炎病毒的基础上,对该毒株的毒力进行了测定,证明其为弱毒株,并试制了一批弱毒活疫苗。论文主要分为以下三个方面: 第一部分为AEV-HD 毒株的病毒鉴定:从病毒的理化性质、血凝性质和形态大小上进行了常规鉴定,结果表明AEV-HD 性质稳定,不受胰酶、乙醚、氯仿、温度（57℃、1 h）影响,无血凝性。电镜下观察病毒为不正圆形,大小基本一致,直径在2530 nm。根据发表的AEV 基因序列设计了一对引物,对AEV-HD 进行了RT-PCR 鉴定,结果扩增出了900bp 目的片段。证明AEV-HD 为AEV 毒株。第二部分为AEV-HD 的病毒特异性和毒力的检测:将AEV-HD 与AEV阳性血清混合,37 ℃作用1 h后经卵黄囊接种6 日龄SPF 鸡胚,并设AEV-HD 病毒接种组对照。结果中和组鸡胚出壳后雏鸡发病率为10%,而病毒组发病率为75%,表明AEV-HD 能被AEV 阳性血清中和,病毒特异性良好。AEV-HD 接种6 日龄SPF 鸡胚后不引起明显的鸡胚病变,鸡胚平均脑系数为4.65%,接近正常鸡胚（4.67%）,而AEV-VR 强毒接种的鸡胚病变明显,平均脑系数为3.67%;脑内接种1 日龄SPF 雏鸡在第10 日才发病,而各强毒株都在第5 天左右发病。表明AEV-HD 是一株毒力较弱的毒株。第三部分为AEV-HD 弱毒疫苗的研制:根据中华人民共和国兽用生物制品质量标准

论文目录

• 文献综述
• 第一章 禽脑脊髓炎研究进展
• 1 病原学
• 1.1 病毒特性
• 1.2 病毒的基因组
• 1.3 生物学特性
• 1.4 病毒的实验室培养
• 2 流行病学
• 2.1 传播方式
• 2.2 发病率和死亡率
• 2.3 流行新特点
• 2.4 潜伏期
• 3 临床症状
• 4 发病机理
• 5 病理变化
• 5.1 大体病变
• 5.2 组织学病变
• 6 诊断方法
• 6.1 病毒的分离
• 6.2 病毒抗原的检测
• 7 鉴别诊断
• 8 免疫机理
• 8.1 主动免疫
• 8.2 被动免疫
• 9 防制措施
• 9.1 疫苗免疫
• 9.2 控制措施
• 10 AE疫苗的研究
• 10.1 活毒疫苗
• 10.2 灭活苗
• 试验研究
• 第二章 AEV的鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 AEV-HD株的理化性质
• 2.2 病毒电镜观察
• 2.3 血凝性试验
• 2.4 RT-PCR鉴定
• 3 讨论
• 3.1 理化鉴定
• 3.2 RT-PCR鉴定
• 第三章 AEV-HD株的毒力测定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 病毒EID50的测定
• 2.2 中和试验
• 2.3 病毒毒力的测定
• 3 讨论
• 3.1 血清中和试验
• 3.2 病毒毒力的测定
• 第四章 AEV-HD株弱毒疫苗的研制
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 病毒纯净
• 2.2 毒种的稳定性
• 2.3 疫苗的试制
• 3 讨论
• 3.1 病毒纯净性检验
• 3.2 毒种的稳定性
• 3.3 疫苗的试制
• 结论
• 存在的问题
• 进一步研究的课题
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介