论文摘要
目的:本课题通过研究磷霉素与氨基糖苷类药物联合应用对铜绿假单胞菌生物被膜体内外的联合效应及对氨基糖苷类药物肾毒性的影响,探讨磷霉素对氨基糖苷类药物在抑制铜绿假单胞菌生物被膜形成方面的增效作用及其减轻氨基糖苷类药物肾毒性方面的作用。方法:应用微量肉汤稀释法测定不同浓度组合的5组抗菌药物（磷霉素分别与氨基糖苷类药物组合）对铜绿假单胞菌临床分离株（n=20）的最低抑菌浓度,并计算FIC指数判定联合效应;采用改良的组织培养平板法建立铜绿假单胞菌PAO1生物被膜模型,应用银染法快速鉴定、扫描电镜观察经不同剂量两类药物联合作用处理后的PAO1生物被膜超微结构,对其形态学进行描述;采用计算机图像处理系统对银染法快速鉴定后的硅胶片进行图像分析;应用MTT活菌计数法测定不同剂量两类药物联合作用后的PAO1生物被膜中的存活细菌数量;采用大鼠皮下埋植组织笼法,通过对大鼠的体重、体温、C-反应蛋白、白细胞计数、局部感染组织菌落计数、组织笼菌落计数,组织笼扫描电镜观察研究磷霉素与氨基糖苷类药物对大鼠体内铜绿假单胞菌生物被膜感染的联合效应;并采用血肌酐、血尿素氮、尿量、尿NAG酶、肾组织病理观察、肾组织透射观察,评价磷霉素对氨基糖苷类药物致大鼠肾毒性的影响。结果:磷霉素与5种氨基糖苷类药物联合应用后,两类药物MIC50显著降低,FIC指数分布:FIC≤0.5占65%～85%;0.5＜FIC≤1占10%～20%;1＜FIC≤2为5%～15%;FIC＞2为0。银染法快速鉴定的形态学结果显示,PAO1生物被膜上分布着浓密黑染交织物质,其间隙中聚集着短杆状细菌体;同一剂量下,联药组的黑染交织物较单药组少,表明联药组的抑制被膜形成作用较单药组显著;磷霉素+阿米卡星和磷霉素+异帕米星联用的抑制被膜形成作用基本相似。扫描电镜观察显示,PAO1菌体呈短杆状,为浓厚的粘液样物质紧密包绕聚集成团,细菌与细菌之间以粘稠的纤维状粘液丝相连;联药组的抑制被膜形成作用较单药组显著;采用计算机图像处理系统对银染法快速鉴定后的硅胶片进行图像分析,平均光密度值随着药物的剂量增大而逐渐减小,联药组的平均光密度值显著低于单药组的平均光密度值（P＜0.05）。MTT活菌计数法结果显示,活菌数量随着药物的剂量增大而逐渐减小,联药组的活菌数量显著低于单药组的活菌数量（P＜0.05）。大鼠体内组织笼实验显示,治疗72小时后联药组的体温、外周血白细胞、C-反应蛋白和体重减少量较单药组和对照组显著下降（P＜0.05）;单药组较对照组下降,但差异无统计学意义（P＞0.05）;异帕米星组较磷霉素组下降,但两组间差异无统计学意义（P＞0.05）。组织匀浆菌落计数显示联药组与其他组相比菌落计数显著下降（P＜0.05）;异帕米星组和磷霉素组较对照组低,但差异无统计学意义（P＞0.05）。组织笼菌落计数较细菌感染局部组织菌落计数高,但差异无统计学意义（P＞0.05）。组织笼扫描电镜观察结果显示,联药组的对生物被膜清除作用较单药组显著。磷霉素对氨基糖苷类药物致大鼠肾毒性影响的研究结果显示,随给药时间的延长,单药组和联药组的血肌酐、血尿素氮及尿NAG酶水平增高。4周时联药组的血肌酐、血尿素氮及尿NAG酶水平与对照组相比升高,但差异无统计学意义（P＞0.05）,而单药组与对照组、联药组相比显著升高（P＜0.05）。4周时的肾组织光镜观察和肾组织透射电镜观察显示:磷霉素+异帕米星联药组的肾损害较异帕米星单药组显著减轻。结论:通过以上研究发现磷霉素与氨基糖苷类药物联用对铜绿假单胞菌生物被膜形成的抑制和杀菌活性具有显著增效作用,且磷霉素可减轻氨基糖苷类药物致肾毒性作用。