论文摘要
目的:长期低剂量亚砷酸钠诱导人骨髓间充质干细胞,从而建立抗砷细胞模型,筛选人类抗砷相关基因。方法:常规条件下分离培养人骨髓间充质干细胞,检测部分生物学特性;实验组用1μmol/L的亚砷酸钠诱导〉14周,对照组不加砷剂平行培养;48小时急性砷毒性试验检测细胞生存率;免疫荧光染色及荧光激活细胞分选术鉴定诱导前后细胞表面分子;流式细胞术进行细胞周期及凋亡检测;实时定量PCR检测不同诱导时间金属硫蛋白MT1E、多药耐药蛋白基因MRP1、人类抗砷相关基因HARRG的表达丰度;软琼脂试验检测细胞是否发生恶性转化;实验组细胞获得抗砷性之后,抽提并纯化实验组和对照组细胞总RNA,分别与Affymetrix UC133 plus 2.0 cDNA表达谱芯片杂交,生物信息学分析差异表达基因并初步进行功能分类。结果:低剂量亚砷酸钠急性刺激能够促进人骨髓间充质干细胞增殖,长期诱导则表现为抑制细胞生长;1μmol/L的亚砷酸钠诱导骨髓间充质干细胞10周后细胞初步表现出了抗砷性,14周后抗性较明显。人骨髓间充质干细胞砷诱导后表型无明显变化,而细胞周期的变化较大,急性刺激期G2/M期和S期细胞增加,G0/G1期细胞减少,适应后细胞周期恢复至诱导前水平;长期1μmol/L亚砷酸钠诱导不引起人骨髓间充质干细胞发生凋亡,超过5μmol/L急性刺激则能够诱导其凋亡;人骨髓间充质干细胞砷诱导一定时期内MT1E、MRP1、HARRG表达增高,并呈动态变化趋势;长期砷诱导后人骨髓间充质干细胞在双层软琼脂上不能克隆化生长,没有发生恶性转化。细胞获得抗砷性后与Affymetrix UC133 plus 2.0基因表达谱芯片杂交,筛选出差异表达基因1876条,其中上调表达基因1120条,下调表达基因756条。结论:长期低剂量砷诱导人骨髓间充质干细胞能够使其产生抗砷性,筛选出差异表达基因1876条。
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标签：人骨髓间充质干细胞论文; 抗砷性论文; 基因芯片论文; 细胞周期论文;