禽流感H9N2型病毒基质蛋白2（M2）的免疫效果研究

论文摘要

本论文对H9N2禽流感病毒（avian influenza virus, AIV）的基质蛋白2（matrix protein2, M2）进行免疫效果研究。共由两部分组成：（一）H9N2禽流感病毒M2DNA疫苗的构建及免疫效果研究；（二）M2DNA疫苗初免-蛋白加强免疫对BALB/c小鼠抗致死量H9N2禽流感病毒的保护效果研究。（一）H9N2禽流感病毒M2DNA疫苗的构建及免疫效果研究DNA疫苗能刺激机体产生持久的体液免疫反应与细胞免疫反应且能快速大量地生产,有可能成为应对流感爆发的有效武器。本研究针对H9N2禽流感病毒A/Chicken/Jiangsu/07/2002的M2基因分别构建了pCAGGSP7-M2（单独表达M2蛋白）和pCAGGSP7-GAG-IRES-M2DNA真核表达质粒（表达M2蛋白的病毒样颗粒）,将其作为DNA疫苗。分别用两种疫苗以100μg剂量经电击免疫BALB/c小鼠五次并于末次免疫后二周用5LD50同源病毒攻击小鼠,通过检测疫苗诱导的抗体水平以及攻毒后小鼠存活率、体重变化和肺部病毒滴度等指标评价疫苗效果。实验结果表明,pCAGGSP7-M2和pCAGGSP7-GAG-IRES-M2质粒作为DNA疫苗五免后对小鼠的保护率分别为40%和30%,pCAGGSP7-M2和pCAGGSP7-GAG-IRES-M2两种DNA疫苗都能诱导小鼠产生明显的IgG抗体应答,pCAGGSP7-GAG-IRES-M2DNA疫苗诱导的IgG水平较pCAGGSP7-M2DNA疫苗低,体重丢失及肺部病毒量两组疫苗差别不大。以上结果表明,两种M2DNA疫苗都能提供小鼠部分保护,基于Gag病毒样颗粒的DNA疫苗设计并没有有效增强M2DNA疫苗的免疫原性和保护效果。（二）M2DNA疫苗初免-蛋白加强免疫对BALB/c小鼠抗致死量H9N2禽流感病毒的保护效果研究本实验室前期研究表明M2蛋白加壳聚糖佐剂滴鼻免疫小鼠能提供很好的免疫保护效果。考虑到M2DNA疫苗不能提供完全保护,本研究采用DNA初免后辅以壳聚糖佐剂的蛋白加强免疫策略来研究M2的免疫效果。我们分别制备了M2DNA疫苗和大肠杆菌表达的去除M2跨膜区的蛋白sM2。免疫分组如下：M2DNA疫苗免疫两次组（D2）、sM2蛋白疫苗免疫两次组（P2）、M2DNA免疫一次sM2蛋白加强免疫一次组（D1P1）、M2DNA免疫一次sM2蛋白加强免疫两次组（D1P2）和M2DNA免疫二次sM2蛋白加强免疫一次组（D2P1）。 M2DNA疫苗采用电击免疫100μg,15ug sM2蛋白加壳聚糖佐剂滴鼻加强。免疫间隔三周,免疫后三周用5LD50同源病毒攻击小鼠。试验检测指标包括存活率,体重丢失率,肺部病毒滴度及IgG抗体水平。实验结果表明,D1P2免疫组能提供小鼠100%保护率,P2组为90%,D1P1和D2P1为50%,D2为10%,对照组为0%。D1P2较P2体重丢失少且恢复快。D1P2和P2肺部病毒量较其他组低,且D1P2和P2两组诱导IgG抗体水平显著高于其他组。综上,sM2蛋白二次免疫能提供小鼠较好的保护,基于M2的疫苗采用DNA疫苗初免蛋白加强二次免疫后能提供小鼠完全保护且明显减轻小鼠病征。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1 流感病毒简介及其生物学特征
• 1.1 流感病毒简介
• 1.2 流感病毒生物学
• 2 流感疫苗研究进展
• 2.1 传统的流感疫苗
• 2.2 新型流感疫苗
• 2.3 免疫增强剂在流感疫苗中的应用
• 第二章 H9N2禽流感病毒M2 DNA疫苗的构建及免疫效果研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 方法
• 3 实验结果
• 3.1 pCAGGSP7-M2和pCAGGSP7-GAG-IRES-M2 DNA疫苗构建
• 3.2 M2 DNA疫苗免疫后诱导的IgG抗体水平
• 3.3 M2 DNA疫苗免疫后对小鼠抗致死量H9N2禽流感的保护情况
• 3.4 M2 DNA疫苗免疫小鼠感染致死量H9N2禽流感三天后小鼠肺部病毒滴度
• 4 讨论
• 第三章 M2 DNA初免-蛋白加强免疫对BALB/c小鼠抗致死量H9N禽流感病毒的保护效果研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 主要材料
• 2.2 方法
• 3 实验结果
• 3.1 sM2蛋白表达及纯化
• 3.2 免疫小鼠抗体滴度测定
• 3.3 不同免疫策略免疫后致死量H9N2感染小鼠的存活率和体重变化
• 3.4 致死量H9N2病毒感染三天后小鼠肺部病毒的滴度
• 4 讨论
• 结语
• 参考文献
• 缩写表
• 读研期间文章发表和录用情况
• 致谢