论文摘要
背景:动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS）是心血管系统中最常见的疾病之一,是多种心血管疾病的共同病理基础,严重威胁着人们的健康。研究表明血管平滑肌细胞的异常增殖是AS发生的重要机制。AS是一种慢性炎症过程,细胞间粘附分子-1（Intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1）与该过程密切相关。肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）可诱导血管平滑肌细胞（Vascular Smooth Muscle Cell,VSMC） ICAM-1的表达,在病变早期,促使单核细胞向内皮细胞粘附、迁移,在进展期病变,促进已迁入病灶的单核细胞激化分化成巨噬细胞,进而聚集脂质而转变成泡沫细胞形成AS,并促进淋巴细胞激活,增加与细胞间的相互作用,形成更多的巨噬细胞,逐渐促使SMC从血管中层向内膜下移行和增殖。这些病理变化在人类动脉粥样硬化发生和发展中起到非常关键的作用。因此,保护平滑肌细胞是AS防治的一个关键环节。失笑散以五灵脂、蒲黄组方,具有活血化瘀,散结止痛之功效。现代药理学研究表明该方能有效防治动脉粥样硬化,本课题以体外培养大鼠血管平滑肌细胞的方法,观察失笑散对肿瘤坏死因子α诱导的大鼠血管平滑肌细胞细胞间粘附分子-1表达的影响,以探讨失笑散抗动脉粥样硬化的可能机制。方法:1.取雄性SD大鼠,进行血管平滑肌细胞的原代培养,取第3-4代细胞用于实验,并以形态学观察和SMα-actin免疫荧光法染色鉴定细胞。2.按照血清药理学实验方法制备失笑散含药血清,将含药血清分为高、中、低剂量组,MTT方法检测各组的细胞活力。3.用TNF-α刺激细胞24h后进行分组,实验分为5组:正常组、TNF-α刺激组、失笑散含药血清高剂量组、中剂量组、低剂量组,采用流式细胞术、逆转录聚合酶链反应,观察失笑散对肿瘤坏死因子α诱导的平滑肌细胞细胞间粘附分子-1蛋白及mRNA水平表达。结果:1.细胞培养及鉴定结果（1）形态学观察:VSMC接种于培养瓶5-7天后细胞己基本融合,呈典型的“峰、谷”状生长. （2） SMα-actin免疫荧光技术鉴定:显微镜下可见95%以上的细胞质呈绿色发亮荧光。以上结果证明培养的细胞为血管平滑肌细胞。2.失笑散各剂量组作用24h与同一时间点正常对照组相比,OD值显著减少（P<0.05）,但失笑散各剂量组OD值之间差异无统计学意义。可见失笑散含药血清对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞无毒副作用,且具有明显的抑制作用。3. TNF-α可诱导VSMC ICAM-1表达增强（P<0.01）;而失笑散可降低TNF-α诱导的ICAM-1mRNA水平及蛋白表达,且呈剂量依赖性（P<0.01）。结论:1.失笑散含药血清对体外培养的大鼠血管平滑肌细胞无毒副作用,且具有明显的抑制作用。2.失笑散含药血清通过抑制肿瘤坏死因子a诱导的平滑肌细胞细胞间黏附分子-1的表达,延缓了动脉粥样硬化的病变进程。