论文摘要
肝纤维化是肝脏对各种原因所致肝损伤的创伤愈合反应,表现为肝内胶原纤维异常增生,肝细胞变性坏死,肝组织结构和功能遭到破坏。临床研究和动物实验都已证明,肝纤维化是慢性肝病发展至肝硬化的必经途径。因此探讨肝纤维化时的病理改变对深入研究肝纤维化的形成机制具有重要意义。用于肝纤维化研究的动物模型有:中毒性肝损伤模型、胆汁性肝损伤模型、免疫性肝损伤性肝纤维化模型等,而本研究则选用小鼠胆总管结扎致肝纤维化的动物模型。该模型因具有操作简单、稳定可靠等特点,成为研究中非常常用的实验模型。在小鼠体内行胆总管结扎术后,可引起胆汁肝内淤积。当肝细胞受到刺激后,趋化因子和细胞因子释放、中性粒细胞等募集到肝脏,进而出现肝细胞凋亡、坏死、肝性炎症,细胞增殖等一系列相关反应。在本课题中,我们通过胆总管结扎手术成功建立并评价了小鼠胆汁淤积性肝纤维化模型,并以此为体内模型研究肝纤维化形成过程中的病理改变,本实验选用与炎症相关的KC-1、MIP-2、ICAM-1和MPO作为评价肝性炎症浸润的指标,用与增殖相关的抗原PCNA、Ki-67和CK-19作为评价细胞增殖的指标,用TUNEL染色和病理切片作为评价凋亡和坏死的指标,研究胆汁淤积性肝纤维化形成中肝性炎症、细胞增殖、凋亡和坏死情况。实验研究结果显示:胆总管结扎后,随着趋化因子和细胞因子的升高,炎症细胞浸润,导致肝损伤。与假手术组相比,模型组肝性炎症、细胞增殖、凋亡和坏死均显著增加。提示肝纤维化的形成是多因素、多环节相互作用和调控的结果,但其确切机制尚未完全阐明。Fox（forkhead/winged helix transcription factor）基因家族是2000年才统一命名的功能多样的“翼螺旋”转录因子,该家族成员具有一个高度保守的Forkhead结构域,具有DNA结合、转录活化和转录抑制等功能。已有研究结果表明肝星形细胞（hepatic stellate cell, HSC）激活是肝纤维化发生的关键环节,而TGF-β1/Smads信号通路是调控HSC活化的主要通路。FoxC1调控的部分靶基因有Smad2、BMP-7、TGF-β1等,提示FoxC1参与了TGF-β1信号通路。FoxL1是表达于胃肠道间叶细胞的转录因子,其Forkhead区域与FoxC1在核苷酸水平的同源性高达83%,由此提示:FoxL1可能通过参与TGF-β1/Smads信号通路,在调控肝纤维化形成过程中发挥重要作用。在课题中我们采用逆转录PCR技术、实时荧光定量PCR技术、免疫组织化学染色技术以及Western blotting技术,全面地探讨FoxL1在肝纤维化进程中各时间点的mRNA和蛋白质表达水平。研究结果显示:在小鼠胆总管结扎术后第1天至14天,随着时间的延长,肝组织中FoxL1 mRNA和蛋白质表达水平逐渐增高,第7天表达至最高峰。以上结果提示FoxL1极有可能在HSC活化和肝纤维化形成的早期发挥重要作用。
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相关论文文献
- [1].Foxl1在小肠上皮和间质中的表达[J]. 基因组学与应用生物学 2019(11)