抗痫神丹对戊四唑点燃癫痫大鼠脑内γ-氨基丁酸、谷氨酸含量及海马c-fos表达的影响

论文摘要

目的:癫痫是一种慢性反复发作性短暂性脑功能失调综合征,以1～14的儿童为多见,因反复发作,社会歧视,长期服用抗痫西药（AEDs）易产生许多毒副作用等而使患者及其家属背负着沉重的身心和经济负担,因此,研制出一种廉价、高效、无毒副作用的药物是当今医务工作者亟待解决的问题。而中医药则在解决这一世界性医学难题方面有着独特的优势。导师在经过多年研究之后,认为小儿本有脾常不足的生理特点,加之若嗜食肥甘、油腻则引起湿聚而生痰,痰浊阻于中焦,则易致食积,食积痰浊久而化热,火热灼津复又生痰,所以说痰、热、食积三者相互影响、互为因果,共同导致了本病的发生。因此,创立了“消食祛痰,凉血熄风”的治痫之法。抗痫神丹即在此理论的指导下,结合现代药理学研究,由羚羊角粉、双钩、橘红、丝瓜络、全蝎、地龙、焦三仙等中药合理组方而成,临床应用十余年,疗效可靠,本实验拟通过传统中医理论和现代科研技术相结合,以戊四唑点燃癫痫大鼠为模型,通过观察抗痫神丹对癫痫大鼠脑内γ-氨基丁酸、谷氨酸及海马c-fos表达的影响来深入探讨该方治疗癫痫的机理,为防治癫痫提供新的手段和方法。方法:8周龄健康SD大鼠（200±50g）50只,适应性饲养3天,随机取10大鼠作为正常对照组,余者采用戊四唑（PTZ）腹腔注射法致痫,每日1次腹腔注射戊四唑（32mg/kg）,持续28天,停药1周后用相同剂量PTZ测试,按着Ono J等的分级方法,凡显示连续5次2级以上惊厥的大鼠为达到点燃标准,入选实验。最后戊四唑共成功诱导出癫痫大鼠36只,造模成功率90%,随机分配给模型组、抗痫神丹大剂量组、抗痫神丹小剂量组,丙戊酸钠组每组各9只。抗痫神丹大、小剂量组,分别灌服抗痫神丹浓缩水煎剂每次15g/kg、7.5g/kg,VPA（丙戊酸钠）组,灌服丙戊酸钠每次400mg/kg,正常对照组、模型组灌服生理盐水,每次1ml,以上药物均为每日2次,疗程28天。造模期间详细记录大鼠惊厥情况,并于最后1次给药后1小时处死所有大鼠,立即进行已拟定指标的测定。结果:（1）造模过程中惊厥发作情况:四组造模大鼠在戊四唑腹腔注射第11天后陆续出现不同等级的惊厥发作。第14日注射戊四唑后惊厥潜伏期时间约12分钟,惊厥发作持续时间约8分钟,随着注射次数的增加,潜伏期逐渐缩短,而惊厥发作持续时间则逐渐延长,第21日注射戊四唑后潜伏期时间约为5分钟,惊厥发作时间约18分钟。第28日注射戊四唑后,潜伏期时间约2分钟,惊厥发作持续时间约36分钟,造模期间除因4只大鼠因惊厥过度而死亡外,共有36只大鼠于第23日全部被点燃,发作级别均在Ⅱ级以上。（2）抗痫神丹对戊四唑点燃大鼠惊厥率的影响:抗痫神丹大剂量组、VPA组与模型组抗惊厥率比较有显著性差异（P﹤0.001）,抗痫神丹小剂量组抗惊厥率高于模型组,有显著性意义（P﹤0.01）,而低于高剂量组（P﹤0.05）及VPA组（P﹤0.05）。说明抗痫神丹及丙戊酸钠都具有显著的抗惊厥作用,抗痫神丹的抗癫痫效果还与剂量存在依赖性（正相关）。（3）抗痫胶囊对戊四唑点燃大鼠发作级别的影响:给药第7天VPA组发作级别较模型组显著降低（P﹤0.05）,说明丙戊酸钠起效较快。给药第14（P﹤0.05）、21（P﹤0.01）、28（P﹤0.001）天抗痫神丹大剂量组、VPA组均较模型组显著降低。抗痫神丹大剂量组在给药第28天时和给药前与给药第7、14天相比有显著差异（P﹤0.01）,VPA组在给药第28天时和给药前,给药第7、14天相比有显著性差异（P﹤0.05）,抗痫神丹小剂量组给药28天时和给药前,给药第14、21天相比有显著性差异（P﹤0.05）,说明抗痫神丹及丙戊酸钠均有降低惊厥发作级别的作用。抗痫神丹大、小剂量组在给药14天时相比有显著性差异（P﹤0.05）。（4）抗痫神丹对戊四唑点燃大鼠惊厥发作潜伏期的影响:模型组的惊厥潜伏期随时间的变化而逐渐缩短,给药前和给药第14、21、28天比较,给药第7天和第28天比较有显著性差异（P﹤0.01）,表明点燃效应在一定时间内可逐渐加强,使惊厥发作阈值降低潜伏期变短。抗痫神丹大、小剂量组及VPA组潜伏期则随着给药时间的推移逐渐延长,抗痫神丹大剂量组给药前与给药第21天、28天比较有显著性差异（P<0.01）,给药第7天和给药21、28天比较有显著性差异（P﹤0.01）。抗痫神丹小剂量组给药前与给药第21天,第28天相比有显著性差异,（P﹤0.01）,VPA组给药前与给药第7天相比有显著性差异（P﹤0.01）,表明抗痫神丹与丙戊酸钠均有一定的提高惊厥发作阈值延长潜伏期的效应。（5）抗痫神丹对戊四唑点燃大鼠惊厥发作持续时间的影响:模型组大鼠惊厥发作持续时间随着时间的推移逐渐延长,也表明点燃效应在一定时间内逐渐增强,从给药第7天（P﹤0.05）到给药第28天（分别P﹤0.01和P﹤0.001）,模型组和抗痫神丹大,VPA组和小剂量组比较均有显著性差异,说明抗痫神丹、丙戊酸钠均有缩短大鼠惊厥发作持续时间的作用,抗痫神丹大剂量组在给药第14天时和抗痫神丹小剂量组比较有显著差异（P<0.05）,抗痫神丹在给药前和给药第14天、21天自身相比,第7天和第21天相比均有显著性差异（P<0.05）,抗痫神丹小剂量组给药前和给药第14天相比有显著性差异（P<0.05）。（6）抗痫神丹对戊四唑点燃大鼠大脑皮质及海马γ-氨基丁酸含量的影响:与正常组相比,模型组大脑皮质及海马GABA含量减低且差异显著（P﹤0.05）,经给药治疗后,抗痫神丹大剂量组、VPA组与模型组大脑皮质及海马GABA相比均升高且有显著性差异（P﹤0.05）,与正常组比较无显著差异（P﹥0.05）,与抗痫神丹小剂量组比较有显著性差异（P﹤0.05）,抗痫神丹大剂量组与VPA组比较无显著性差异（P﹥0.05）。（7）抗痫神丹对戊四唑点燃大鼠大脑皮质及海马谷氨酸含量的影响:与正常组相比,模型组大脑皮质及海马Glu含量升高且差异显著（P﹤0.05）,经给药治疗后,抗痫神丹大剂量组、VPA组与模型组大脑皮质及海马Glu相比均降低且有显著性差异（P﹤0.01）,与正常组比较无显著差异（P﹥0.05）,与抗痫神丹小剂量组比较有显著性差异（P﹤0.05）,抗痫神丹大剂量组与VPA组比较无显著性差异（P﹥0.05）。（8）抗痫神丹对海马c-fos表达的影响:测定荧光强度显示,模型组分别比较正常组（P﹤0.001）、抗痫神丹大、小剂量组（P﹤0.001和P﹤0.05）和VPA组（P﹤0.05）,均有显著性差异。正常组与抗痫神丹大剂量组分别比较抗痫神丹小剂量组（P﹤0.05）和VPA组（P﹤0.05）,均有显著性差异,正常组与大剂量组比较无显著性差异（P﹥0.05）,VPA组与小剂量组比较无显著性差异（P﹥0.05）,荧光指数结果与荧光强度一致,表明抗痫神丹能明显降低PTZ致痫大鼠海马c-fos的表达。结论:1抗痫神丹对戊四唑点燃大鼠惊厥发作有明显的拮抗作用,其作用机理可能是通过降低戊四唑点燃大鼠海马Glu含量、c-fos的表达、增加GABA含量来实现的。2本实验结果为临床上应用抗痫神丹治疗癫痫提供了科学的实验依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 抗痫神丹对戊四唑点燃癫痫大鼠脑内γ-氨基丁酸、谷氨酸含量及海马c-fos 表达的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 中医药治疗癫痫的研究进展
• 致谢
• 个人简历