论文摘要
猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染猪引起的以母猪繁殖障碍和不同日龄猪呼吸系统疾病为主要特征的急性、高度接触性传染病。该病自1987年首次发生于美国以来,北美、欧洲以及亚洲等多个国家均有该病发生和流行的报道,因此,该病的发生给世界养猪业造成巨大的经济损失,成为严重危害养猪业发展的一种重要的病毒性传染病。我国作为世界养猪业大国,该病的发生一度给我国养猪业造成巨大的经济损失,尤其是从高致病性PRRSV（HP-PRRSV）出现以来,针对PRRS的防治已经成为中国养猪业发展中的一个棘手问题。因此,建立一种快速、有效的用于PRRSV诊断的方法对该病的临床调查、预防及控制都具有非常重要的意义。在本研究中,我们首先根据猪场的发病情况、流行病学特点以及临床症状对长春市某猪场送检的疑似PRRS病例进行初步诊断,并据此初步诊断为猪繁殖与呼吸综合征。为了对该病进行确诊,本研究从病理学和病原学角度进一步进行了系统的研究分析。本实验对送检病死猪的心、肝、脾、肺、肾、小肠等组织脏器进行病理学切片,观察结果发现,肺脏表现为典型的间质性肺炎的病理变化,这是PRRS的重要示病病变,因此可作为该病临床诊断的重要参考依据;此外,细菌学的分离培养结果排除了病原菌混合感染的可能。本研究还利用Marc-145细胞进行了病毒分离,收集细胞病变液进行电镜负染观察,可见有与PRRSV形态大小一致的病毒粒子。提取病变细胞液的RNA用设计的PRRSV引物进行RT-PCR扩增,结果得到与预期大小相一致的目的条带,用针对NSP2基因[124]的HP-PRRSV引物进行扩增,也得到与文献中大小相同的目的条带,而用CSFV、PCV特异性引物进行扩增,结果无条带出现。综合分析以上实验结果,可以确诊该病的发生原因为HP-PRRSV感染所致。由于所有的HP-PRRSV毒株都缺失了四个保守序列,即在5’非编码区122处一个腺苷的缺失,3’非编码区15278处一个鸟嘌呤核苷的缺失,和Nsp2中两个不连续的缺失,包括在第482处（L482）一个氨基酸的缺失和第533-561处（S533-A561）29个氨基酸的缺失。本研究根据Nsp2的基因序列设计引物,所设计引物跨越Nsp2的两端,并分别对经典PRRSV和HP-PRRSV进行RT-PCR扩增,可见有与预期目的基因片段大小相一致的片段,从而成功建立了区分高致病与经典PRRSV毒株的RT-PCR诊断方法。特异性试验结果表明,仅PRRSV特异性引物扩增出目的条带,而CSFV、PCV引物的扩增结果均为阴性,这表明该方法具有较强的特异性;敏感性试验结果表明,该方法最低可检测到10个TCID50的病毒粒子,该结果表明该方法较为敏感;此外,将临床样本的RT-PCR检测结果分别与病毒分离以及ELISA检测结果进行比较,结果表明,该方法重复性较好且较为敏感。以上结果不仅为临床上对PRRS的诊断提供了理论依据,同时高致病与经典PRRSV RT-PCR鉴别诊断方法的建立为PRRS的临床检测、流行病学调查以及PRRS综合防治措施的制定奠定基础。