平乡县人民医院，病理科054500
摘要目的探究转化生长因子β（TGF-β）在老年性白内障合并2型糖尿病患者中的表达变化，为老年性白内障合并2型糖尿病体内的发病原因的分子水平及作用疾病的研究提供数据支持。方法本次研究对象选取我院2014年1月至2017年12月收治的老年性白内障合并2型糖尿病患者68例，选取同期我院收治的老年白内障无糖尿病患者60例为对照组，获取患者中央部的晶状体前囊膜并提取其上皮细胞中的TGF-β及mRNA，并采用免疫荧光法观察其晚期糖基化终末产物（AGEs）对体外培养人晶状体上皮细胞TGF-β表达的影响。结果（1）老年性白内障合并2型糖尿病患者晶状体上皮细胞中TGF-β均有表达，且背景清晰，点状范围较大。就晶状体上皮细胞中TGF-β1表达来讲，老年性白内障合并2型糖尿病患者的表达高于老年性白内障患者，但TGF-β2、TGF-β3的表达均低于老年性白内障患者，差异比较具有统计学意义（P＜0.05）。（2）不同浓度的AGEs与人晶状体上皮细胞共培养7d后，TGF-β红色荧光均有所增强。结论老年性白内障合并2型糖尿病患者晶状体上皮细胞中TGF-β表达水平呈上调，对其原因进行分析可知，AEGs是诱导其上调的主要原因，为全面阐明老年性白内障合并2型糖尿病患者的分子发病机制提供新的思路和数据。
关键词：白内障晶状体；上皮细胞；晚期糖基化终末产物；转化生长因子β
转化生长因子β（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）是调节晶状体上皮细胞增殖与分泌的重要指标，因此其在老来白内障的形成中至关重要[1]。有研究显示[2]，TGF-β参与了老年性白内障合并2型糖尿病患者白内障的发生与发展，但是对于其分子机制的分析尚无研究，其国内外对此的相关报道较少。鉴于此，本次研究为了填补此块空白，选取我院2014年1月至2017年12月收治的老年性白内障合并2型糖尿病患者68例，探究转化生长因子β（TGF-β）在老年性白内障合并2型糖尿病患者中的表达变化，为老年性白内障合并2型糖尿病体内的发病原因的分子水平及作用疾病的研究提供数据支持。研究内容现汇报如下。
1资料与方法
1.1一般资料
本次研究对象选取我院2014年1月至2017年12月收治的老年性白内障合并2型糖尿病患者68例，选取同期我院收治的老年白内障无糖尿病患者60例为对照组，获取两组患者中央部的晶状体前囊膜。纳入标准：1）病理学与内科学联合诊断为老年性白内障合并2型糖尿病患者；2）患者术前血糖水平稳定。排除标准：1）青光眼、眼底视网膜脱离、眼外伤等病变或其他内眼手术史；2）合并有其他精神系统疾病。本研究经医院医学伦理相关部门核准，患者家属均签署知情同意书。
1.2试剂
牛血清蛋白（Albuminfrombovineserum(BSA)，酷尔化学科技（北京）有限公司）。
1.3方法
（1）在患者进行白内障超声乳化人工晶状体植入手术后取患者的晶状体前囊膜，置于EP管中保存，备用。取患者晶状体前囊膜抽取蛋白进行变性操作后滴加硝酸-纤维素膜置于室温下晾干后以5%的牛血清蛋白进行封闭，随后依次孵化最后进行X线胶片曝光、显影、定影。本次研究采用ImagePro软件进行密度灰度值定量分析。（2）制备患者的晶状体前囊膜总RNA中以β-actin作为内参，采用实时荧光聚合酶链反应检测TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3的mRNA表达。不同指标给予相应的β-actin内参。（3）晶状体上皮细胞的培养与AGEs干预：预先准备培养板并接种晶状体上皮细胞，待细胞贴壁后将AGEs加入到培养液中，7d后取出小玻片进行甲醛固定，作为荧光检测备用。（4）晶状体上皮细胞中TGF-β的表达：以磷酸缓冲盐进行漂洗随后加入抗体孵育，并以磷酸缓冲盐冲洗3遍后进行二抗孵育，同样冲洗后封片，观察其荧光表达。
1.4统计学分析
计量资料采用t检验、配对t检验、秩和检验、配对秩和检验等方法进行处理，计数资料采用χ2检验，Fisher精确检验等方法进行处理，P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
（1）老年性白内障合并2型糖尿病患者晶状体上皮细胞中TGF-β均有表达，且背景清晰，点状范围较大。就晶状体上皮细胞中TGF-β1表达来讲，老年性白内障合并2型糖尿病患者的表达高于老年性白内障患者，但TGF-β2、TGF-β3的表达均低于老年性白内障患者，差异比较具有统计学意义（P＜0.05）。具体结果见表1。（2）不同浓度的AGEs与人晶状体上皮细胞共培养7d后，TGF-β红色荧光均有所增强。具体结果见图1。
3讨论
TGF-β有5种亚型，即TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、TGF-β5[3]。其中TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3存在于哺乳动物中，TGF-β1、TGF-β2蛋白及其mRNA表达于绝大多数眼组织，TGF-β3仅表达于晶状体上皮组织和纤维，房水和玻璃体中无表达，晶状体上皮细胞中同时表达有3种TGF-β亚型的受体[4]。本次研究结果显示，老年性白内障合并2型糖尿病患者晶状体上皮细胞中TGF-β均有表达，且背景清晰，点状范围较大。就晶状体上皮细胞中TGF-β1表达来讲，老年性白内障合并2型糖尿病患者的表达高于老年性白内障患者，但TGF-β2、TGF-β3的表达均低于老年性白内障患者，差异比较具有统计学意义（P＜0.05）。
综上所述，老年性白内障合并2型糖尿病患者晶状体上皮细胞中TGF-β表达水平呈上调，对其原因进行分析可知，AEGs是诱导其上调的主要原因，为全面阐明老年性白内障合并2型糖尿病患者的分子发病机制提供新的思路和数据。
参考文献
[1]方敏,胡慧玲,王梅.血清内脏脂肪素和肿瘤坏死因子α与老年2型糖尿病患者白内障的关系[J].临床眼科杂志,2016,24(6):481-484.
[2]宋蔚,赵帅,任百超,等.2型糖尿病患者白内障术后黄斑水肿与房水中TGF-β2、FGF及MCP-1的研究[J].临床眼科杂志,2016,24(5):385-387.
[3]易莲,张艳君,王莎,等.老年2型糖尿病并发白内障患者门诊早期干预临床路径研究[J].中国卫生质量管理,2013,20(5):28-30.
[4]张少维,刘丽,黄毅,等.晶状体密度测量在2型糖尿病合并白内障患者中的临床应用研究[J].中国眼耳鼻喉科杂志,2017,17(3):191-194.