论文摘要
背景与目的非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）是一种获得性代谢性应激性肝损伤,包括单纯性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver ,NAFL）、脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis ,NASH）及其相关肝硬化和肝细胞癌。NAFL已成为发达国家和富裕地区的第一大慢性肝病和肝酶异常的首要病因,在未来也有可能成为我国慢性肝病的首要原因。NAFL可以与病毒性肝炎并存,同时与2型糖尿病、代谢综合征以及心脑血管因素密切相关。因此,NAFL已经成为当代肝病领域的新挑战。核受体（nuclear receptor ,NR）大家族是与类固醇激素受体同源的一类配体依赖性转录因子,包括经典的甾体激素受体和胸腺激素受体,以及许多孤儿核受体（其生理配体或激活剂还没有发现）。这些转录因子通过结合位于基因启动子上的DNA序列（反应元件）而激活靶基因。代谢性核受体（Metabolic nuclear receptors）是一组与糖、脂和能量代谢密切相关的核受体的通称。其在糖脂代谢、胰岛素分泌及其信号转导、氧化应激、炎症、细胞生长与分化等重要生命过程中起关键作用。代谢性核受体作为转录因子,严格调控其靶基因的表达,其中包括诸多参与糖、脂质氧化还原的酶以及细胞内主要的抗氧化系统。代谢性核受体调控功能异常是多种密切相关的代谢性疾病的共同病理生理基础。众多研究显示,FXR、LXR、PPAR等代谢性核受体是机体糖脂代谢的调控中心,已经成为当今非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD）研究的热点,有关这些核受体的配体及其信号通路的研究,对阐明NAFL的发病机制、寻找有效的治疗靶点具有非常重要的意义。法尼醇X受体（The farnesoid X receptor ,FXR）是主要在肝脏、肠道、肾脏和肾上腺表达的一种代谢性核受体。因胆汁酸是其内源性配体,故又称为胆汁酸受体（bile acid receptor,BAR）。它通过调节胆汁酸合成、摄取和分泌相关基因的表达调节胆汁酸代谢和胆固醇代谢。近年的研究发现,FXR是一种多靶点的核受体,具有多种调节作用,涉及糖、脂肪、胆汁酸、胆固醇等多种代谢相关的基因和信号转导的途径,其表达异常与脂肪肝、胆结石（gallstone disease, GD）等疾病密切相关。有关FXR在人体的研究鲜见报道。本实验以NAFL合并GD患者的肝组织为研究对象,与单纯性GD患者的肝组织和正常人的肝组织比较,研究FXR表达的变化和肝脏脂肪和胆汁酸代谢相关靶基因的变化,探讨FXR在NAFL发病机制中的作用,为NAFL的治疗提供新的途径。方法收集一般情况良好,无发热、显性黄疸,转氨酶升高在正常上限2倍以下的因胆囊结石行胆囊切除术的患者20例。分为两组,NAFL+GD组10例,男3例,女7例,平均年龄47.76±3.62岁;临床与病理诊断符合中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组制定的非酒精性脂肪性肝诊断标准;GD组10例,男4例,女6例,平均年龄51.80±2.48岁;无NAFL。肝移植供者5例为正常对照组（N组）,均为男性,平均年龄33±1.58岁。所有患者均排除病毒性、药物性、酒精性及自身免疫性肝病,肝癌,亦排除结核、肿瘤等全身性疾病和其他器官系统疾病。手术患者在知情同意的情况下,于胆囊切除术中取肝左叶边缘直径约1cm大小肝组织,肝移植供肝在修肝结束后于相同位置取同样大小的肝组织,立即置于液氮下保存备用。取部分肝组织做HE染色、免疫组化染色、免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜观察。部分肝组织提取总蛋白和总RNA,用Western blot检测FXR、SHP、CYP7A1、LXR、SREBP-1C蛋白含量,用Real-time PCR检测FXR、LXR、SHP的mRNA表达情况。本研究获得重庆医科大学第二临床学院伦理委员会同意。结果1、免疫组化染色结果显示: FXR的表达在N组、GD组和NAFL+GD组之间无明显差别（P>0.05）。NAFL+GD组和GD组与N组比较,BSEP表达减弱（P<0.05）,但两组之间表达无差异（P>0.05）。与GD组和N组比,NAFL+GD患者的肝组织SREBP-1C表达明显增强（P<0.01）,且随着肝脂肪变性程度加重其表达更强。2、免疫荧光、激光共聚焦显微镜观察结果显示:与GD组和N组比,NAFL+GD患者的肝组织表达FAS明显增强。3、Western blot检测结果显示,NAFL+GD患者FXR蛋白含量低于GD患者和正常人（P<0.05）,LXR、SREBP-1C蛋白含量升高（P<0.05）,但SHP、CYP7A1蛋白含量无变化。GD组和N组之间各项指标蛋白含量无差别（P>0.05）。4、Real-time PCR结果显示,与GD患者和正常人相比,NAFL+GD患者FXRmRNA表达减低（P<0.01）,LXRmRNA表达增高（P<0.01）,SHPmRNA表达无差异（P>0.05）。结论1、FXR表达下调、而LXR、SREBP-1C及其靶基因FAS表达增加可能是非酒精性脂肪肝肝脏脂肪沉积的分子基础。2、NAFL患者肝组织FXR、BSEP表达减弱,胆汁酸代谢紊乱,可能是其易合并胆石症的分子基础。3、各组SHP的表达无明显差异,在人体肝组织标本中未能证实FXR通过SHP反馈抑制CYP7A1的表达而调节胆汁酸的代谢,也未能显示FXR通过SHP反馈抑制SREBP-1C的表达而调节脂肪酸的代谢。