脐血间充质干细胞向肝样细胞和胰岛样细胞的分化研究

论文摘要

目的： 培养扩增脐血（Umbilical cord blood，UCB）间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）；探索脐血间充质干细胞分化为肝细胞，胰岛细胞的条件；观察体外诱导的胰岛样细胞能否在1型糖尿病小鼠模型体内发挥降糖作用。 材料方法： 1．羟乙基淀粉沉淀法分离脐血中的有核细胞，以MesencultTM培养基（含10％的生长添加物）培养。 2．流式细胞仪检测细胞表面抗原，测定细胞周期。 3．DMEM／F12+10％FBS+1μmol／L地塞米松+5U／ml胰岛素，向脂肪细胞诱导，0.375％油红O染色法，观察诱导后细胞浆中的脂滴。 4．DMEM／F12+10％FBS+0.1μmol／L地塞米松+10mmol／L B-磷酸甘油+50μmol／L维生素C向成骨细胞诱导，碱性磷酸酶（钙—钴法）和钙沉积（von Kossa法）判断诱导的细胞是否具有成骨细胞的特征。 5．DMEM／F12+0.5μmol／L地塞米松+10ng／ml HGF（Hepatocyte growth factor，HGF）+10ng／ml EGF（Epidermal growth factor，EGF）+1×ITS（Insulin-transferrin-selenium，ITS）诱导2周，DMEM／F12+0.5μmol／L地塞米松+10ng／ml HGF+10ng／ml Oncostatin M+1×ITS继续诱导2周，向肝细胞诱导分化。 6．向胰岛细胞诱导 方案一：H-DMEM含5％FBS持续诱导；方案二：DMEM／F12（不含FBS）添加10ng／ml EGF、1mmol／L B-巯基乙醇诱导7d，含5％FBS的H-DMEM继续诱导；方案三：DMEM／F12（不含FBS）添加10ng／ml EGF、1mmol／L B-巯基乙醇诱导7d，H-DMEM培养基添加3ng／ml Activin A和10ng／ml HGF继续诱导。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 脐血间充质干细胞的分离培养及鉴定
• 实验材料和方法
• 第一部分 实验结果
• 第一部分 讨论
• 第二部分 脐血间充质干细胞向肝样细胞的分化
• 实验材料和方法
• 第二部分 结果
• 第二部分 讨论
• 第三部分 脐血间充质干细胞向胰岛样细胞的分化
• 实验材料和方法
• 第三部分 结果
• 第三部分 讨论
• 第四部分 胰岛样细胞在1型糖尿病小鼠体内的作用
• 实验材料和方法
• 第四部分 结果
• 第四部分 讨论
• 总结
• 参考文献
• 英文缩略词表
• 发表文章
• 致谢