低能N～+注入选育高产金霉素链霉菌的实验研究

论文摘要

在回顾离子束生物工程的研究进展和现状以及金霉素研究性状的基础上,本文的主要目的是利用低能离子束技术对金霉素生产菌--金霉素链霉菌进行处理,选育高产菌株,为进一步产业化奠定基础。做了以下工作: 1 通过离子束诱变育种技术选育高产金霉素生产菌。首先研究了不同能量、不同剂量的低能离子注入金霉素生产菌对存活率的影响,其存活率曲线为“马鞍型”,重点考察了不同剂量N+注入金霉素生产菌的诱变率以及与产量的关系,当能量为10keV,注入剂量为70×2.6×1013N+/cm2时,金霉素链霉菌的突变率较高,在此注入剂量下,进行多次离子注入诱变和大量筛选,获得三株稳定高产菌株。最高效价为11700u/ml。 2 对选育出的一株（产量为11700u/ml）进行优化培养,主要对发酵培养基的氮源、碳源、发酵等条件进行了优化。初步确定高产菌株的发酵培养优化条件,并且在最优条件下,测定其效价为11900u/ml。 3 尝试利用同工酶技术对选育出的金霉素链霉菌三株高产菌进行新菌种鉴定,结果表明酯酶同工酶可以准确地区别金霉素链霉菌新菌种,而过氧化物酶同工酶则不能。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 离子束生物工程学研究概况
• 1.1.1 离子束生物工程学的建立与兴起
• 1.1.2 离子束生物工程学的应用研究
• 1.2 金霉素链霉菌简简介
• 1.3 本论文研究的目的和内容
• 1.3.1 本论文研究的目的
• 1.3.2 本论文研究的内容
• 第二章 离子束生物工程装置简介
• 2.1 装置结构简介
• 2.1.1 离子源
• 2.1.2 质量分析
• 2.1.3 靶室
• 2.2 单粒子简介
• +注入选育高产金霉素生产菌'>第三章 N⁺注入选育高产金霉素生产菌
• 3.1 前言
• 3.2 实验材料与方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.1.1 供试菌株
• 3.2.1.2 培养基
• 3.2.1.3 主要试剂
• 3.2.2 实验方法
• 3.2.2.1 生产工艺
• 3.2.2.2 菌体生长量的测定方法
• 3.2.2.3 金霉素标准曲线的绘制
• 3.2.2.4 金霉素发酵液效价的测定
• 3.3 选育高产菌的结果与分析
• 3.3.1 出发菌的发酵曲线
• 3.3.2 氮离子注入条件的研究（能量剂量致死率）
• 3.3.2.1 氮离子注入能量对存活率的影响
• 3.3.2.2 氮离子注入剂量对存活率和诱变率的影响
• +注入对金霉素链霉菌菌落形态的影响'>3.3.3 N⁺注入对金霉素链霉菌菌落形态的影响
• +注入的工艺流程'>3.3.4 N⁺注入的工艺流程
• 3.3.5 高产菌株的筛选系谱
• 3.3.6 高产菌株的遗传稳定性考察
• 3.3.7 高产菌株的发酵曲线
• 第四章 高产菌株培养工艺的优化
• 4.1 前言
• 4.2 实验材料与方法
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.1.1 实验菌株
• 4.2.1.2 主要试剂
• 4.2.1.3 主要仪器设备
• 4.2.1.4 培养基
• 4.2.2 实验方法
• 4.2.2.1 分析方法
• 4.2.2.2 生产工艺
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 初始碳源对金霉素效价的影响
• 4.3.1.1 玉米淀粉对金霉素效价的影响
• 4.3.1.2 黄豆饼粉对金霉素效价的影响
• 4.3.2 初始氮源对金霉素效价的影响
• 4.3.2.1 不同品种酵母粉对金霉素效价的影响
• 4.3.2.2 蛋白陈对金霉素效价的影响
• 4.3.3 培养条件的优化
• 4.3.3.1 种龄对金霉素效价的影响
• 4.3.3.2 接种量对金霉素效价的影响
• 4.3.3.3 装液量对金霉素效价的影响
• 4.3.3.4 摇床转数对金霉素效价的影响
• 4.4 高产菌株培养工艺的确定
• 第五章 同工酶技术在金霉素链霉菌鉴别中的应用
• 5.1 前言
• 5.2 材料与方法
• 5.2.1 实验材料
• 5.2.1.1 菌株
• 5.2.1.2 试剂
• 5.2.1.3 仪器
• 5.2.2 实验方法
• 5.2.2.1 菌体培养
• 5.2.2.2 菌休收集
• 5.2.2.3 酶液制备
• 5.2.2.4 工作溶液
• 5.2.2.5 聚丙烯酰胺凝胶板制备
• 5.2.2.6 电泳分离
• 5.2.2.7 染色固定和记录结果
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 条件的确定
• 5.3.2 供试菌株酯酶同工酶酶谱的分析
• 5.3.3 供试菌株过氧化物酶同工酶酶谱的分析
• 5.4 讨论
• +注入金霉素链霉菌的机理初探'>第六章 N⁺注入金霉素链霉菌的机理初探
• 第七章 总结与展望
• 参考文献
• 攻读学位论文期间发表的学术论文