论文题目: 抗乙型肝炎病毒药物靶标的筛选和验证
论文类型: 博士论文
论文专业: 药物分析
作者: 杨静
导师: 王升启
关键词: 乙型肝炎病毒,基因表达谱芯片,药物作用靶点,反义寡核苷酸
文献来源: 中国人民解放军军事医学科学院
发表年度: 2005
论文摘要: 乙型肝炎病毒感染严重影响人类的健康和生命安全,目前没有特效防治方法。存在的关键问题在于HBV基因组较小,易发生突变,限制了靶向病毒的抗病毒药物的发展。最近的研究表明,抑制宿主细胞中某些蛋白的功能可以阻断病毒感染。与病毒基因组相比,人类基因组序列中可能包括更多与病毒复制有关的基因。应用DNA微阵列(芯片)技术系统分析宿主基因表达,是一种从宿主细胞中发现潜在抗病毒靶标的有效方法。因此,本课题旨在应用基因芯片技术筛选和验证宿主细胞内潜在的抗HBV药物作用靶标,为新型抗病毒药物的筛选奠定基础。 本研究首先制备了芯片通用型阳性对照,并对芯片的特性进行了简要分析,在此基础上制备了病毒感染相关基因表达谱芯片。应用此芯片比较了HepG2.2.15细胞与HepG2细胞表达谱差异,并研究了HepG2.2.15细胞经抗HBV药物干预前后细胞基因表达谱变化情况,筛选出在HBV感染后差异表达、而药物干预后表达逆转的基因,获得了可能的HBV感染关键分子。通过RT-PCR、Western印迹技术验证以及生物信息学分析发现ASGPR1、fibronectin可能成为肝细胞内潜在的抗HBV药物作用靶标。在此基础上,应用反义技术、配基、抗体、小分子化合物等途径抑制肝细胞中ASGPR1、fibronectin的表达或功能,发现HepG2.2.15细胞内HBV的复制受到明显抑制,为证明ASGPR1和fibronectin成为抗HBV药物作用靶点的可能性提供了有力证据。 综上所述,本研究通过筛选和初步验证确定ASGPR1、fibronectin可能成为抗HBV药物的新型作用靶点。
论文目录:
英文缩写字中英文全称对照表
中文摘要
英文摘要
前言
实验材料
第一部分 病毒感染相关基因表达谱芯片的制备和质量控制
第一节 基因芯片阳性对照的制备及特性分析
一、方法
二、结果
三、讨论
第二节 病毒感染相关基因表达谱芯片的制备和质量控制
一、方法
二、结果
三、讨论
第三节 总结
第二部分 HBV感染功能相关基因筛选和差异表达水平验证
第一节 HBV感染功能相关基因筛选
一、方法
二、结果
三、讨论
第二节 HBV感染功能相关基因差异表达水平验证
一、方法
二、结果
三、讨论
第三节 总结
第三部分 抗HBV药物潜在靶点的可药性验证
第一节 抑制ASGPR1表达的反义寡核苷酸可阻断HBV的复制
一、方法
二、结果
三、讨论
第二节 纤连蛋白——抗HBV药物的潜在靶点
一、方法
二、结果
三、讨论
第三节 总结
全文总结
参考文献
附表1 病毒感染相关基因探针列表
附表2 相关基因在拉米夫定处理后不同时间点的相对表达水平列表
附表3 相关基因在阿地福韦处理后不同时间点的相对表达水平列表
附表4 相关基因在IBE5处理后不同时间点的相对表达水平列表
文献综述
致谢
个人简历
代表性论文全文
发布时间: 2005-09-05
参考文献
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