奈韦拉平对甲状腺未分化癌细胞增殖分化及碘摄取能力的影响

论文摘要

目的由于甲状腺未分化癌细胞的恶性程度高、细胞增殖快,甲状腺未分化癌确诊时往往已经发生转移,手术、放疗及化疗等常规治疗方法效果多不理想。高分化的甲状腺癌摄碘能力尚可,所以,可以用放射性碘治疗杀死原发或转移部位的肿瘤,但对于甲状腺未分化癌来说却不能用放射性碘治疗,因为,甲状腺未分化癌细胞内钠/碘同向转运体（NIS）、甲状腺过氧化物酶（TPO）、甲状腺球蛋白（TG）、促甲状腺激素受体（TSHR）等甲状腺特异性基因的表达减少甚至缺失,尤其是NIS表达减少,导致甲状腺未分化癌细胞无法摄取放射性碘,使其不适于放射性碘治疗,其治疗十分棘手。内源性逆转录酶（RT）基因在体内主要由逆转录转座子及内源性逆转录病毒两种重复序列编码,参与各种病理生理过程。在高分化组织中,逆转录酶的表达量较低,而在细菌细胞、胚胎组织、未分化及变异细胞中其表达量较高,这暗示逆转录酶与细胞潜在的增殖分化能力可能存在着直接的联系。逆转录酶抑制剂对体内逆转录酶的活性具有抑制作用,并可以抑制细胞增殖,诱导分化。基于以上理论,本研究旨在通过奈韦拉平（一种非核苷类逆转录酶抑制剂）诱导甲状腺未分化癌FRO细胞,观察其对FRO细胞增殖及细胞内NIS等甲状腺特异性基因表达的影响,并进行细胞摄碘能力的测定,比较药物诱导前后碘摄取的变化,探讨奈韦拉平能否抑制甲状腺未分化癌细胞增殖、诱导分化及诱导细胞摄取放射性碘,试图寻找一种能使甲状腺未分化癌细胞摄取碘的药物,以便用碘治疗杀灭甲状腺未分化癌细胞。方法1.细胞增殖抑制率检测实验：MTT法检测不同浓度奈韦拉平（0,100,200,350,500umol/L）对FRO细胞的增殖抑制作用；2.细胞计数检测奈韦拉平对细胞增殖抑制的可逆性；3.Hoechst33258染色检测不同浓度奈韦拉平（0,200,350,500umol/L）诱导后FRO细胞的凋亡情况,台盼蓝染色检测奈韦拉平（0,200,350,500umol/L）对FRO细胞的毒性作用；4.倒置相差显微镜照相观察奈韦拉平诱导后FRO细胞表型变化；5.real-time PCR检测奈韦拉平诱导后FRO细胞和甲状腺乳头状癌BHP细胞中NISmRNA和TSHRmRNA的表达；6.普通RT-PCR和real-time PCR检测加入TSH后FRO细胞中NISmRNA的表达；7.放射性碘摄取实验观察奈韦拉平诱导前后FRO细胞摄碘的变化。结果1.不同浓度奈韦拉平作用后,FRO细胞增殖受到抑制,抑制作用随着药物浓度增大而增强,差异有统计学意义（P<0.05）；2.奈韦拉平所诱导的FRO细胞增殖抑制具有可逆性；3.在350mmol/L浓度范围内奈韦拉平没有引起明显的细胞凋亡,对细胞没有产生明显的毒性作用,大于该浓度时毒性作用增加；4.奈韦拉平诱导后FRO细胞表型向分化型细胞表型发展；5.奈韦拉平诱导后FRO细胞中NISmRNA和TSHRmRNA的表达较对照组增加,差异有统计学意义（P<0.01和P<0.05）；奈韦拉平诱导后BHP细胞中NISmRNA和TSHRmRNA的表达较对照组相比,差异无统计学意义（P>0.05）；6.奈韦拉平预处理过的FRO细胞,在加入TSH后细胞中NISmRNA的表达进一步增加,差异有统计学意义（P<0.05）；7.奈韦拉平诱导前后FRO细胞放射性计数分别为[（5.34±0.93）×103计数·min-1/106个细胞]和[（6.76±0.60）×103计数·min-1/106个细胞],差异无统计学意义（P>0.05）。结论奈韦拉平能够抑制FRO细胞增殖,且这种对增殖的抑制作用是可逆的,同时能够诱导FRO细胞表型向分化型细胞发展,并诱导FRO细胞中NISmRNA和TSHRmRNA表达增加,表明奈韦拉平能够诱导甲状腺未分化癌细胞分化；用奈韦拉平预处理过的FRO细胞,在TSH刺激下NISmRNA的表达进一步增加,表明奈韦拉平对FRO细胞中TSH/TSHR途径有修复作用,能够部分恢复TSH对NIS表达的调控作用,但遗憾的是,并未观察到奈韦拉平引起FRO细胞摄碘能力增加。

论文目录

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