功能聚合物在蛋白质分离纯化中的应用

论文摘要

本论文主要研究新型功能材料在蛋白质分离纯化中的应用,包括两部分。第一部分采用无皂乳液聚合法制备水凝胶-聚（N-异丙基丙烯酰胺-丙烯酸）（PNIPAM/AAc）。所制得的水凝胶表面含有大量羧基基团,其表面荷电性对pH值具有灵敏、快速的响应特性。对其在蛋白质分离纯化中的表现性能进行了研究,结果表明该水凝胶对于血红蛋白具有选择性吸附,可作为固体吸附介质用于混合蛋白中血红蛋白的萃取分离。在pH6.0时,采用2mg水凝胶为吸附剂,吸附20min后,对1mL200μg mL-1的血红蛋白样品吸附率为93%。吸附后的血红蛋白可采用pH8.6的Tris-HCl缓冲溶液进行洗脱,洗脱率为76%。据此建立了全血样品中血红蛋白的固相萃取分离过程,电泳结果表明能获得纯度较高的的血红蛋白。第二部分合成了聚合离子液体（聚（1-乙烯-3-乙基咪唑溴盐））并将其固载到碳纳米管上制得了聚合离子液体-碳纳米管复合物。以此复合物为固相吸附材料,结合顺序注射分析技术研究了白蛋白的在线分离纯化过程。在pH5.2,进样量为2mL的条件下,50μgmL-1白蛋白的吸附效率达到91%。采用0.04mol L-1柠檬酸缓冲溶液可将吸附的白蛋白进行定量洗脱。整个分离纯化过程耗时500s,对白蛋白的富集倍数为5。将所建立的分离体系应用于人血中白蛋白的分离纯化,经SDS凝胶电泳验证,可有效分离出白蛋白。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 概述
• 1.1 蛋白质的分离纯化方法
• 1.1.1 色谱分离法
• 1.1.2 电泳分离法
• 1.1.3 固相萃取法
• 1.2 环境敏感型水凝胶
• 1.2.1 PNIPAM温敏性微凝胶
• 1.2.2 改性PNIPAM类微凝胶
• 1.2.3 PNIPAM水凝胶的应用
• 1.3 聚合离子液体
• 1.3.1 聚合离子液体的应用
• 1.4 本论文选题意义及研究内容
• 第2章 水凝胶聚（N-异丙基丙烯酰胺-丙烯酸）在血红蛋白分离纯化中的应用
• 2.1 引言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 仪器与试剂
• 2.2.2 水凝胶聚（N-异丙基丙烯酰胺-丙烯酸）的合成与表征
• 2.2.3 血红蛋白吸附试验
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 凝胶的合成与表征
• 2.3.2 蛋白的吸附与洗脱
• 2.3.3 洗脱剂的选择
• 2.3.4 CD 光谱
• 2.4 全血样品分析
• 2.4.1 全血样品中血红蛋白的分离纯化
• 2.4.2 SDS-PAEG凝胶电泳实验
• 2.5 本章小结
• 第3章 聚合离子液体-碳纳米管复合物在线固相萃取分离白蛋白
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 仪器与试剂
• +Br^-）的制备'>3.2.2 聚1-乙烯-3-乙基咪唑溴盐Poly（ViEtIm⁺Br^-）的制备
• 3.2.3 PIL-MWNTs 的制备
• 3.2.4 PIL-MWNTs微柱的填制
• 3.2.5 实验流程
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 PIL-MWNTs的表征
• 3.3.2 蛋白质的在线分离纯化
• 3.3.3 全血中白蛋白的分离
• 3.4 本章小结
• 第4章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表论文