应用于生猪饲养的益生微生物的筛选及其生物学性能评价

论文摘要

我国是世界第一养猪大国。在过去的半个多世纪,饲养者使用抗生素作为生猪饲料添加剂,满足了生猪集约化及规模化饲养的需求。但抗生素作为饲料添加剂带来诸多不利影响,如药物残留、致畸、致癌、致突变等副作用,因此生态养猪法应运而生,成为当前研究热点。生态养猪法指的是利用益生微生物替代抗生素应用于生猪饲养,包括将益生微生物制备为微生态制剂添加到猪饲料及近几年兴起的将益生微生物用于制备发酵床提供生态垫料而利于生猪养殖。发酵床养殖法具有无副作用、无残留污染、不产生抗药性等优点,对生猪生长发育具有协同促进作用,故成为研究热门。为分析微生态制剂饲料中存活的主要的微生物菌群,本文用传统分离法对市售动物微生态制剂菌群进行了分离,根据其菌落、菌体形态及对不同培养的需求,得到7株不同的微生物；之后利用利用PCR-DGGE技术将上述7种菌区分为2株不同的微生物；经测序后鉴定,2株分离菌株分别属于植物乳酸杆菌和酿酒酵母菌。为了评价益生菌株的生物学性能,本文探讨了不同pH值、温度、胆盐、金属铜和需/厌氧对筛选菌体外生长的影响。实验结果表明,当pH小于2.5或铜离子高于150 ppm时,植物乳杆菌无法生长,而酿酒酵母数量略有下降；尽管胆盐和金属离子对两种菌影响较小,但当温度为42℃时,酿酒酵母数量下降了6个数量级。此外,为了探索抗生素对生态养猪法的影响,本研究评价了不同剂量阿莫西林、盐酸土霉素、乙酰甲喹、喹乙醇、克拉霉素、盐酸环丙沙星、土霉素对生产养殖中常见益生微生物和致病微生物的影响,以饲料中抗生素添加量、抗生素在动物体内转化率为依据,观察0.1×国标、1×国标和10×国标对应的抗生素残留对垫料中主要益生微生物生长的影响。结果表明,垫料中益生微生物对抗生素抵抗能力差,在1×国标下基本难以存活,而致病微生物对抗生素抵抗能力强,在1×国标浓度下大量生长,甚至有的可在10×国标浓度抗生素下存在。因此,本文的研究对生态生猪饲养过程中合理和安全使用抗生素提供了基础理论和数据,为微生态制剂与垫料床的推广和普及具有积极作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 益生微生物应用于生猪养殖的现状及研究进展
• 1.1 前言
• 1.2 益生菌的种类及微生态制剂的类型
• 1.2.1 益生菌种类及其常用菌特性
• 1.2.2 微生态制剂类型
• 1.3 益生微生物益于生猪养殖的机理
• 1.3.1 建立优势菌群,遏制有害物质的产生
• 1.3.2 生成多种消化酶,调节生猪新陈代谢
• 1.3.3 形成膜菌群屏障,增强机体免疫功能
• 1.4 益生微生物养猪较抗生素养猪的优点
• 1.4.1 促进生猪增重,提高饲料利用率
• 1.4.2 提高机体免疫力,减少疾病发生
• 1.4.3 净化养殖环境,减少粪臭及污染
• 1.4.4 改善产品品质,倡导绿色养殖
• 1.5 益生微生物养猪注意事项
• 1.5.1 针对性
• 1.5.2 活性与剂量
• 1.5.3 时期与时间
• 1.5.4 抗生素
• 1.5.5 保存要求
• 1.6 国内外益生微生物开发及应用情况比较
• 1.6.1 起步时间不同
• 1.6.2 研发进度差异
• 1.6.3 市场推广及规范情况
• 1.7 展望
• 第二章 动物微生态制剂中益生菌的分离与鉴定
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 材料
• 2.2.2 主要试剂与仪器设备
• 2.2.3 相关试剂与培养基配制
• 2.2.4 实验方法
• 2.3 结果
• 2.3.1 部分筛选菌株菌落形态
• 2.3.2 DNA提取结果
• 2.3.3 PCR提取结果
• 2.3.4 DGGE结果
• 2.3.5 菌株测序结果
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 第三章 2种分离菌株益生性能测定
• 3.1 前言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 材料
• 3.2.2 主要试剂与仪器设备
• 3.2.3 相关试剂与培养基配制
• 3.2.4 实验方法
• 3.3 结果
• 3.3.1 酸度对分离菌株的影响
• 3.3.2 温度对分离菌株的影响
• 3.3.3 胆盐对分离菌株的影响
• 3.3.4 铜离子对分离菌株的影响
• 3.3.5 氧气对分离菌株的影响
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 第四章 几种益生菌和致病菌对常用抗生素耐受性的比较
• 4.1 前言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 材料
• 4.2.2 主要试剂与仪器设备
• 4.2.3 相关试剂与培养基配制
• 4.2.4 实验方法
• 4.3 结果
• 4.3.1 不同抗生素对垫料中益生微生物的影响
• 4.3.2 不同抗生素对垫料中致病微生物的影响
• 4.5 小结
• 第五章 结论与建议
• 5.1 结论
• 5.2 建议
• 致谢
• 参考文献
• 附录 A1试剂
• 附录 A2仪器设备
• 个人介绍
• 攻读学位期间的研究成果