四君子汤防治D-半乳糖所致小鼠脑细胞线粒体损伤机理研究

论文摘要

1 选题思路和研究目的 随着人口老龄化的日益明显,如何延缓衰老,提高年老者的生活质量,已成为医学界研究的重大课题。近年来,中医药以“肾为先天之本”理论为指导,开展了大量研究工作,阐明了一些中医药抗衰老的机理。然而,衰老是一个多因素综合作用的复杂过程,其中脾作为“后天之本”对衰老过程的影响亦不容忽视。 中医学对衰老的认识,早在《黄帝内经》时代就已有概说。《黄帝内经》对于人进入一定年龄阶段将必然衰老的原因和衰老发生机制,有较为全面的论述。《内经》提出:“女子七岁,肾气盛,齿更发长。……五七,阳明脉衰,面始焦,发始坠。……丈夫八岁,肾气实,发长齿更。……八八,则齿发去。肾主水,受五脏六腑之精而藏之,故五脏盛乃能泻。今五脏皆衰,筋骨懈坠,天癸尽矣,故发鬓白,身体重,形步不正,而无子耳。”(《素问·上古天真论》)“人生十岁,五脏始定血气已通,其气在下,故好走。……七十岁,脾气虚,皮肤枯;……百岁,五藏皆虚,神气皆去,形骸独居而终矣”。(《灵枢·天年》)等观点,明确认为,衰老将随增龄而必然发生,随增龄而自发的脏腑气血的生理病理变化为衰老的内在原因。 脾胃虚损与衰老相关的学说源于《内经》,唐、宋、元、明、清诸医家,均对其有所发展。著名的补土学家李东垣将其重视脾胃的学术思想亦贯入到抗老延年的观点中,曰:“凡有此(脾胃)病者,虽不易变生他疾,己损天年”,并主张“调理脾胃,老年当先”(《脾胃论》)。李中梓则提出了“先天之本在肾,后天之本在脾”的观点。张介宾曰:脾肾“皆为五脏六腑之本”,“土为万物之源,胃气为养生之本……是以养生家必以脾胃为先……善养脾胃之道,所以便能致寿”(《景岳全书》)。吴昆曰:“诸脏腑百骸皆受气于脾胃,而后能强,若脾胃一亏,则众体皆无以受气,日见蔽弱矣。”(《医方考》)。龚廷贤曰:“凡年老之人,当以养元气,健脾胃为主”(《衰老论)。王文禄曰:“是以养脾者……养生之要也。”(《医先》)等等。总之,脾胃受到了普遍性的高度重视,并把这一重视脾胃的思想极大地贯入到抗老延年的理论指导和治法方药之中,并以之与补肾抗衰老相提并论,视之为抗衰老的两大最重要原则。 现代研究表明,健脾法可通过不同环节对抗机体的衰老,其延缓衰老作用值得进一步探讨。本课题以健脾益气代表方四君子汤为研究手段,观察其对衰老小鼠模型mtDNA缺失的影响,以期从基因水平探讨脾与衰老的关系,阐明健脾益气法延缓衰老的分子作用机制。研究结果将丰富中医“脾胃学说”理论的内涵,为延缓衰老提供新的思路和理论依据,并为开发研制抗衰老新药奠定理论基础。 2 研究方法 2 1 小鼠衰老模型的建立

论文目录

• 前言
• 1. 《内经》确立了衰老的基本概念
• 2. 中医古今文献有关对衰老机理的述
• 3. 现代医学衰老机理的研究
• 4. 四君子汤延缓衰老作用的研究
• 5. 本课题研究的意义
• 实验研究
• 实验材料与方法
• 1. 实验动物与分组
• 2. 亚急性衰老动物模型的建立与评估
• 3. 处理因素
• 4. 统计学方法
• 标本采集、提取及制备
• 1. 小鼠脑组织标本采集
• 2. 取新鲜的海马组织
• 3. 脑组织匀浆的制备
• 观测指标
• 1. 小鼠行为学观测
• 2. 小鼠脑组织NO和NOS含量的测定
• 3. 谷光甘肽过氧化物酶（GSH-Px） 活性测定
• 4. 琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase，SDH） 比活性测定
• 5. 小鼠海马组织线粒体 DNA缺失的测定
• 6. Fura-2/AM双波长荧光法测定小鼠海马钙浓度
• 7. 透射电镜样品制备及观察
• 8. 脑细胞凋亡的检测方法
• 实验结果
• 1. 一般情况观察
• 2. 四君子汤对D-半乳糖诱致小鼠学习记忆障碍的改善作用
• 3. 四君子汤对D-半乳糖诱致学习记忆障碍小鼠脑组织NO含量和NOS活性的影响
• 4. 四君子汤对D-半乳糖诱致学习记忆障碍小鼠脑内GSH-Px和SDH活性的影响
• 5. 四君子汤对D-半乳糖诱致学习记忆障碍小鼠海马神经细胞内钙离子浓度的影响
• 6. 四君子汤对小鼠脑海马神经细胞线粒体损伤时DNA突变的影响
• 7. 电镜
• 8. 小鼠脑神经细胞凋亡检测
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 在校期间发表论文情况