论文摘要
目的:观察促肝细胞生长素（pHGF）和结缔组织生长因子（CTGF）反义寡核苷酸（ASODN）对人肾小管上皮细胞HKC上皮-间质细胞转分化,及对大鼠肾间质纤维化的作用。方法:细胞实验:用巨噬细胞趋化因子-1和马兜铃酸I联合用药诱导建立HKC上皮-间质细胞转分化模型。分别给与pHGF、CTGF ASODN和（pHGF+CTGF ASODN）联合用药。流式细胞仪检测12h、24h时HKC细胞凋亡率;RT-PCR方法检测α-SMA的mRNA表达水平;细胞免疫组化检测HKC细胞α-SMA、TGF-β1、FN的蛋白表达水平。动物实验:48只清洁级Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为假手术空白对照组、手术模型对照组、CTGF错义寡核苷酸对照组（CTGF MSODN）、pHGF组、CTGFASODN组、（pHGF+CTGF ASODN）联合用药组。以上各组造模后给予不同处理,饲养14d,然后处死大鼠。碱水解比色法检测新鲜湿重大鼠肾组织胶原定量;Masson染色观察肾皮质胶原形态学改变;RT-PCR检测大鼠肾组织α-SMA的mRNA表达水平;免疫组化检测大鼠肾肾皮质α-SMA、TGF-β1、FN蛋白表达水平。结果:细胞试验:流式细胞仪检测:24 h模型组细胞凋亡率9.1%,浓度为15、150、1500 ng/ml的pHGF细胞凋亡率为3.3%—4.4%,与模型组比较,有显著性差异,p＜0.01;CTGF ASODN无显著差异,p＞0.05;RT-PCR方法:模型组的α-SMA/GAPDH比值为0.91±0.002,pHGF组、CTGF ASODN组和联合用药组α-SMA/GAPDH比值分别为0.68±0.015、0.61±0.005、0.65±0.010。与模型对照组比较,三者均有统计学意义,p＜0.05。但协同拮抗作用经金正均概率和法分析:Q=0.572,＜0.85,二者为拮抗作用;免疫组化检测:pHGF、CTGF ASODN和联合用药均降低α-SMA、TGF-β1、FN蛋白水平。动物试验:碱水解比色法:湿重肾组织胶原含量UUO模型组均值为4.85±0.201μg/mg,pHGF组均值为3.76±0.134μg/mg,CTGF ASODN组均值为3.34±0.306μg/mg,联合用药组为4.06±0.179μg/mg,CTGF MSODN错义寡核苷酸对照组为4.91±0.172。与UUO模型组比较,pHGF组、CTGF ASODN组及联合用药组均有显著性差异,p＜0.01。但协同拮抗作用,经金正均概率和法分析:pHGF和CTGF ASODN两种药物的Q=0.349,＜0.85,二者为拮抗作用;②Masson染色:与UUO模型对照组相比,pHGF、CTGF ASODN及联合用药组的肾脏着色绿染的胶原纤维面积明显减少;③RT-PCR检测:UUO模型组α-SMA/β-actin比值为1.31±0.049,CTGF ASODN组为0.77±0.022,有统计学意义,p＜0.05;④免疫组化:pHGF、CTGF ASODN及二者联合用药均明显降低α-SMA、TGF-β1、FN蛋白表达水平。结论:pHGF和CTGF ASODN在离体试验和在体试验,二者均抑制肾小管上皮细胞的上皮-间质细胞转分化,抑制肾脏间质纤维化。但二者联合用药,没有协同作用。
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