监测人TCRαβT细胞CDR3谱系漂移、TCR基因重排方法的建立和初步应用

论文摘要

背景：近年来，病毒感染、肿瘤、自身免疫病、移植等病理状态下T细胞的应答与耐受取得较大发展，对这些疾病状态下特异T细胞产生机制、监测方法、在个性化治疗中的应用、相应抗原表位疫苗的开发研究有着重大理论和潜在临床应用价值。目前，“ELISpot技术”、“FCM检测细胞内细胞因子”、“四聚体技术”等可检测密切相关（已知抗原）特异T细胞的功能和频数，但是不能提供特异T细胞的分子特征和整个样本中T细胞的组成信息。因每个T细胞有着自己独特的TCR CDR3分子，不同T细胞克隆具有不同序列的CDR3基因组成（不同长度），从而形成多样性的CDR3基因谱型，CDR3区的序列决定其结构，从而决定TCR的特异性，或者说，CDR3相当于T细胞的“指纹”，监测CDR3序列的多态性和长度分布以及不同病理状态下的频率变化（谱系漂移），可以反映特定T细胞克隆扩增的程度，从而反映T细胞功能状态。经典的克隆选择理论认为这些特异T细胞来源于T细胞受体库中已有的T细胞“优势增生”，但随着外周B细胞BCR“二次重排”的研究进展，已证实外周T细胞同样存在TCR的“二次重排（编辑／修正），即T细胞能以一种部分或全新的V（D）J重排的新受体取代原有的受体，从而能清除自身反应性细胞，或者是改变针对自身抗原的反应性，亦或更好的作用于微生物。对不同病理状态下特异T细胞TCR分子特征的鉴定和动态变化监测，探讨其和TCR“二次重排”的相关性，建立相应的研究技术和模型受到广泛的关注。 目的 （1）建立监测人TCR αβ T细胞CDR3谱系漂移的免疫扫描谱型分析技术（immunoscope spectratyping technique），分析正常人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）中TCR αβ T细胞CDR3谱系的多态性和长度分布；监测活动性慢性乙型肝炎（Chronic Hepatitis B，CHB）、急性T淋巴细胞白血病（T-lineage acute lymphoblastic leukemia，T-ALL）、外周造血干细胞（peripheral blood stem cells，PBSC）移植前后患者PBMC中TCR αβ T细胞CDR3谱系漂移情况，并鉴定T细胞株Jurkat的TCR分子特征。为感染、肿瘤、移植等疾病的细胞免疫应答机制、诊断、治疗研究提供新的思路与方法；为TCR二次重排（second rearrangement）研究提供监测TCR动态变化的技术； （2）建立监测人TCR αβ T细胞TCR基因重排的连接介导PCR方法(Ligation-

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 监测人TCR αβ T细胞CDR3谱系漂移的免疫扫描谱型分析技术的建立与初步应用
• 第一节 监测人TCR αβ T细胞CDR3谱系飘移的免疫扫描谱型分析技术的建立
• 第二节 慢性活动性乙型肝炎患者外周血TCR αβ T细胞CDR3谱系的初步分析
• 第三节 急性T淋巴细胞白血病患者外周血TCR αβ T细胞CDR3谱系的初步分析
• 第四节 免疫扫描谱型分析技术对单／寡／多克隆样本中TCR αβ T细胞CDR3谱系的动态监测
• 第一章附表 附图
• 第一节附表
• 第一节附图
• 第二节附图
• 第三节附图
• 第四节附图
• 第一章小结
• 第二章 监测人TCR αβ T细胞TCR基因重排方法的建立初步应用
• 第一节 监测人TCR αβ T细胞TCR BD基因重排时RSS断裂末端的LM-PCR方法的建立
• 第二节 TCR基因重排调节蛋白（非同源末端重组系统蛋白）mRNA表达的监测和应用
• 第二章第一节附图
• 第二章第二节附图
• 第二章小结
• 第三章 抗CD3×抗CEA BsAb体外介导T细胞活化抗肿瘤时CDR3谱系漂移和机制的初步探讨
• 第一节 抗CD3×抗CEA BsAb和效、靶细胞的结合及介导PBL的杀肿瘤效应
• 第二节 抗人CD3×抗CEA BsAb介导PBL抗肿瘤时TCR β链CDR3谱系变化探讨
• 第三章小结
• 第四章 文献综述
• 综述一 人TCR αβ T细胞TCR β链CDR3谱型与疾病研究概况及进展
• 综述二 外周T细胞TCR二次重排（编辑／修正）与选择
• 综述三 抗CD3×抗肿瘤抗原双特异性抗体介导T淋巴细胞抗肿瘤效应与机制研究进展
• 全文总结
• 英文缩略词表
• 成果
• 致谢
• 附：原创性说明及版权使用授权说明