红景天苷对培养乳鼠心肌细胞肌质网释放游离钙浓度的影响

论文摘要

目的探讨红景天苷对心肌细胞肌质网释放钙离子的影响,从细胞水平进一步证明红景天苷对心肌细胞的正性肌力作用。方法应用第三代荧光指示剂Fluo-3/AM负载经差速贴壁法及化学抑制法纯化培养4d的大鼠乳鼠心肌细胞,分为3组:正常对照组（加D-hanks液）;不同浓度红景天苷组（15ug/mL,30ug/mL 60ug/mL）;维拉帕米阻断+不同浓度红景天苷组（15ug/mL,30ug/mL 60ug/mL）。用实时全光谱激光共聚焦显微镜动态观察心肌细胞胞浆内钙离子荧光强度变化,扫描心肌细胞内荧光强度变化图像,每隔2秒扫描一次,连续扫描6min,并采图;以平均荧光强度变化反映心肌细胞内游离钙离子浓度的相对水平。激光共聚焦系统采用NIS-Elements AR3.1软件控制,激发波长为488nm,发射波长为520nm。检测心肌细胞内游离钙离子荧光信号强度的变化,观察红景天苷对培养心肌细胞肌质网释放钙离子的影响。结果D-Hanks液中,正常对照组心肌细胞内的平均游离钙离子浓度不变。D-Hanks液中,分别加入浓度为15ug/mL,30ug/mL 60ug/mL的红景天苷时,心肌细胞内的平均游离钙离子浓度升高,峰值由524.11±3.11,530.61±4.40,532.24±3.40分别上升到574.08±4.65,591.86±3.64, 618.66±4.27,（P<0.01）,前后差异有统计学意义。前后差值两两比较,差异有统计学意义,（P<0.01）,有剂量依赖性。达峰时间为5.38±1.87,5.63±2.11,6.90±1.87,（P>0.05）,无时间依赖性。加入维拉帕米阻断心肌细胞膜外钙内流后,加入浓度为15ug/mL,30ug/mL 60ug/mL的红景天苷引起心肌细胞内钙离子浓度升高,峰值由357.74±3.13,387.17±2.37,391.43±1.34分别上升到480.86±3.98, 496.70±3.08 ,522.18±3.19 ,（P<0.01）,两者之间差异有统计学意义。前后差值两两比较,差异有统计学意义,（P<0.05）,有剂量依赖性。结论红景天苷能增加心肌细胞肌质网释放游离钙离子浓度,影响心肌兴奋-收缩偶联过程,具有正性肌力作用。

论文目录

• 中英文缩略词
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1 材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 实验试剂
• 1.3 主要仪器、器材
• 2 方法
• 2.1 新生大鼠心肌细胞的分离、纯化及培养
• 2.2 Fluo-3/AM 的负载
• 2.3 细胞内游离钙的测定
• 2.4 实验分组
• 2.5 统计方法
• 3 结果
• 3.1 D-Hanks 液对细胞内游离钙离子荧光强度的影响
• 3.2 不同浓度的红景天苷对细胞内游离钙离子浓度的影响
• 3.3 红景天苷对维拉帕米阻断心肌细胞膜钙通道后细胞内游离钙离子浓度的影响
• 3.4 盐酸维拉帕米及红景天苷对心肌细胞内游离钙离子荧光图像的影响
• 4 讨论
• 展望及后续工作
• 参考文献
• 心肌细胞体外培养模型研究概况
• 前言
• 1. 生物材料
• 2. 培养方法
• 2.1 离体心脏灌注法
• 2.2 心肌细胞酶消化法
• 2.3 组织块体外培养法
• 2.4 体外三维培养法
• 3. 讨论
• 3.1 离体心脏灌注法
• 3.2 心肌细胞酶消化法
• 3.3 组织块培养法
• 3.4 体外三维培养法
• 参考文献
• 学术论文发表目录
• 致谢