雷公藤内酯醇对癫痫大鼠电压门控钾通道kv1.1表达的影响

论文摘要

目的：本实验通过观察癫痫大鼠海马CA3区神经元细胞形态改变、检测癫痫大鼠该区电压门控钾通道kvl.1蛋白表达水平,研究雷公藤内酯醇（triptolide, TL）对kvl.1活性的影响作用,进一步探讨TL对癫痫大鼠神经元的保护作用及其机制。方法：30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、雷公藤组（n=10）,雷公藤组大鼠腹腔注射TL15μg/（kg·d）,同时对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水,注射7天后,雷公藤组与模型组通过颈内皮下注射海人酸（Kainic acid, KA）1Omg/kg,浓度为5mg/ml致痫,对照组大鼠颈内皮下注射等量的生理盐水。72h后,各组大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉,左心室灌流后断头取脑组织,将脑两半球分离,左半球固定做石蜡切片,一部分切片结晶紫染色法观察神经元形态,另一部分切片免疫组化检测大鼠海马CA3区电压门控钾通道kvl.1蛋白表达情况,右半球液氮冻存,Western Blot方法检测大鼠海马CA3区kvl.1蛋白表达水平。结果：1.制作大鼠癫痫模型结果：雷公藤组与模型组大鼠颈内皮下注射KA后,大鼠出现四肢痉挛,直立,跌倒,翻转,达到Racine六级评价标准Ⅳ-Ⅴ级,脑电图出现大量的高尖波及尖慢复合波等异常波。雷公藤组大鼠癫痫发作的潜伏期较模型组时间长,癫痫的发作程度较模型组轻,发作时间以及持续时间也较模型组短。对照组大鼠无任何反应。2.结晶紫染色观察海马神经元改变：通过低倍镜观察,未用KA处理的对照组未见神经元形态改变及数量减少,经KA处理大鼠及TL干预大鼠的海马整体形态均较正常组大,并且雷公藤组的海马变大较明显。经过TL预处理的癫痫大鼠海马CA3区的椎体细胞部分被保存,且形态与正常神经元相似。颈内皮下注射KA致痫72h后,大鼠脑海马神经元皱缩、变小,椎体细胞变性或者丢失,CA3区神经元丢失现象较明显。3.免疫组化染色检测大鼠海马区kvl.1蛋白表达变化结果：电压门控钾通道kvl.1蛋白在对照组、模型组及雷公藤组大鼠脑海马均有广泛分布,并以锥体细胞层为主。免疫组化染色高倍镜下可见阳性细胞,即胞浆与胞膜上有棕黄色颗粒,以CA3区较明显。模型组大鼠的阳性细胞数较对照组和雷公藤组少,且阳性细胞着色浅,少有突起。模型组的平均光密度值分别较对照组和雷公藤组显著减少（P<0.05）；对照组与雷公藤组kvl.1蛋白表达结果无显著性差异（P>0.05）。4. Western Blot蛋白免疫印迹检测大鼠海马区kvl.1蛋白相对浓度的结果：在大鼠海马神经元中电压门控钾通道kvl.1蛋白有表达,模型组kv1.1蛋白表达减少,雷公藤组大鼠表达较模型组多。模型组大鼠海马CA3区kvl.1蛋白相对浓度与雷公藤组和对照组均有明显差异（P<0.05）,对照组与雷公藤组kvl.1蛋白相对浓度无显著性差异（P>0.05）。结论：TL对KA致痫大鼠神经元有保护作用,其作用的发挥可能与TL增加海马CA3区神经元kvl.1的表达有关。

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