论文摘要
椪柑（Citrus reticulata Blanco）是我国最重要的主栽宽皮柑橘类型之一。生产中,采后病害和品质劣变会导致巨大的经济损失,因此防腐与保鲜是椪柑采后亟待解决的问题。实践证明,热处理作为一种物理手段对改善果实贮藏性能有一定的效果,但是对其作用机理的研究还十分有限。研究发现SNARE（可溶性N-己基顺丁烯二酰亚胺-敏感融合蛋白附着蛋白受体）蛋白在各种逆境应答中起着重要的调节作用,主要通过介导囊泡运输来识别外界逆境刺激并激活机体自身的防御反应,且SNARE蛋白参与的囊泡分泌过程与细胞壁的构建紧密相关。前期研究发现热处理能诱导柑橘VAMP显著上升表达。VAMP作为SNARE的家族成员之一,在柑橘中的表达模式及其作用机制还不清楚。本研究以椪柑（Citrus reticulata Blanco）成熟果实为材料,经52℃热水处理后分别置于常温（20℃）和冷库（4℃）贮藏。石蜡切片观察热处理对外果皮细胞结构的影响,并测定木质素含量的变化；定量qRT-PCR及western blotting分析热处理与VAMP7基因在表达和翻译水平的变化,以期为热处理提高果实耐贮藏性提供理论依据。获得的主要结果如下：1.从椪柑果实中克隆到2个VAMP成员,CitVAMP71, CitVAMP72。运用电子克隆法结合3’-RACE技术获得CitVAMP71片段长度为1028 bp, CitVAMP72片段长度为1009 bp。柑橘中2个CitVAMP7在氨基酸水平上与拟南芥ATVAMP7同源性达到80%,说明CitVAMP7属于VAMP家族成员。2.热处理对CitVAMP71和CitVAMP72基因表达有明显的影响。半定量与Real-timePCR结果显示CitVAMP71和CitVAMP72表达量在处理后显著升高,黄皮层的表达量增加更为明显。在后期冷库贮藏中,CitVAMP71和CitVAMP72表达量均高于常温贮藏中表达量,且果皮与果肉的表达量呈相反趋势。3.热处理对CitVAMP71蛋白翻译水平有明显的影响。Western blotting结果显示,CitVAMP7在黄皮层中的翻译量要小于果肉。热处理后,CitVAMP71蛋白在果肉中2h和12h有显著的上调。相对而言,CitVAMP72蛋白翻译量没有显著的差异。4.热处理增加了果皮细胞壁的厚度且促进了次生壁的形成。石蜡切片观察显示热处理增加了椪柑果皮细胞壁的厚度；同时通过对木质素含量的测定,热处理显著地提高了木质素含量。以上研究结果表明,热处理提高了CitVAMP71基因的表达和翻译水平,且果实通过细胞壁的增厚来响应外界逆境（热处理）的刺激,不仅增强了细胞的支持作用而且为防止外界病原菌的侵染提供了物理屏障。推测热处理诱导CitVAMP71表达,加速载有细胞壁相关物质的囊泡运输从而促进细胞壁的增厚,为果实抵御外界逆境及病虫害侵染增强天然屏障效应。且本研究为热处理提高果实耐贮藏性提供一定理论依据。