ADAM33在肺间质纤维化小鼠中的表达与γ干扰素干预效应的研究

论文摘要

目的:比较小鼠γ干扰素腺病毒重组体（AdCMVmIFN-γ）和重组mIFN-γ对博莱霉素诱导小鼠肺间质纤维化模型的治疗作用以及对锌依赖性去整合素金属蛋白酶33（ADAM33）表达的影响。方法:48只雄性ICR小鼠分8组:阴性对照组（NC）,阳性对照组（PC）,不同时期给予转基因治疗组（A、B、C）,不同时期给予重组γ干扰素治疗组（D、E、F）。除NC组小鼠于第0天经鼻滴入生理盐水其余各组同天经鼻滴入博莱霉素造模,A、B、C组于第7天、14天、21天经鼻滴入带有mIFN-γ基因的复制缺陷型腺病毒（AdCMVmIFN-γ）,D、E、F组于第7天、14天、21天连续6天给予腹腔注射重组γ干扰素（rmIFN-γ）。所有小鼠于造模后第35天处死,处死前测肺功能（肺容积V、0.1秒用力肺活量FEC0.1/FVC、静态肺顺应性Cst）,收获支气管肺泡灌洗液（BALF）,上清和血清经酶联免疫吸附实验检测mIFN-γ浓度,右肺上中叶行苏木素-伊红（H-E）、Masson三色染色,右下叶检测羟脯氨酸（HYP）含量,左肺提取总RNA和总蛋白,用半定量逆转录-聚合酶链式反应和蛋白免疫印迹法了解肺组织中IFN-γ和ADAM33的表达。结果:（1）各组肺纤维化小鼠HYP含量与NC组比均有显著增高（P<0.01）;除B组外,V、Cst与NC组相比均明显降低（P<0.05）。（2）各组小鼠间比较,C组小鼠BALF中mIFN-γ明显增高（P<0.01）。（3）与NC组比较,PC组和A组小鼠肺组织ADAM33均显著增高（P<0.05）;各治疗组与PC组比较,仅C组ADAM33表达明显降低（P<0.01）,其他各组两两比较差异无显著性。结论:ADAM33在博莱霉素致肺纤维化小鼠中表达增加,以腺病毒载体为介导mIFN-γ在小鼠肺局部转基因表达对ADAM33起明显负调节作用,使其表达减少;重组mIFN-γ短期治疗方案未能明显降低ADAM33的表达。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 第二章 材料
• 2.1 常用耗材
• 2.2 实验试剂
• 2.3 实验仪器
• 2.4 工作液
• 2.5 试剂盒
• 2.6 实验动物
• 第三章 方法
• 3.1 动物模型分组、建立
• 3.1.1 实验动物分组
• 3.1.2 动物模型的建立
• 3.2 小鼠呼吸生理的测定
• 3.3 标本的收集
• 3.4 肺组织病理
• 3.5 肺组织RNA 提取及半定量RT-PCR 检测
• 3.6 肺组织总蛋白提取及蛋白免疫印迹WESTERN-BLOT 检测
• 3.6.1 蛋白样品的制备
• 3.6.2 蛋白定量
• 3.6.3 SDS-PAGE 电泳
• 3.7 肺组织羟脯氨酸测定（按试剂盒说明操作）
• 3.8 小鼠BALF 及血液上清MIFN-Γ的测定
• 3.9 统计学处理
• 第四章 结果
• 4.1 博莱霉素致小鼠肺纤维化及对ADAM33 的影响
• 4.2 ADCMVMIFN-Γ转基因表达MIFN-Γ和RMIFN-Γ对博莱霉素致小鼠肺纤维化治疗作用及对ADAM33 的影响
• 4.2.1 小鼠BALF 和血清中mIFN-γ含量
• 4.2.2 rmIFN-γ和AdCMVmIFN-γ对各期肺纤维化模型的干预效果
• 4.2.3 各组小鼠肺组织中ADAM33 和IFN-γ的关系
• 第五章 讨论
• 第六章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录A 腺病毒滴度检测（TCID50 法）
• 附录B 检测小鼠肺功能参数计算原理
• 附录C 博莱霉素致小鼠肺纤维化动态演变
• 缩略词表
• 综述
• 个人简历