甲钴胺对周围神经损伤后运动终板再生修复的影响

论文摘要

周围神经损伤后骨骼肌功能的恢复一直是神经科学领域的一大热点问题。骨骼肌是周围神经系统的靶器官,骨骼肌正常功能的维持有赖于神经的支配和调节。周围神经损伤后,骨骼肌如果不能及时获得神经再支配,将发生不可逆的萎缩甚至功能丧失。躯体运动神经末梢,形态学常称运动终板（motor end plat, MEP）,生理学又称神经肌肉接头（neuromuscular junction,NMJ）是存在于骨骼肌和神经纤维之间的特化区域。神经功能的再生和修复最终要靠运动终板的再生与重建,终板的功能状态反映肌肉的功能状态。近年来,国内外做了大量关于周围神经损伤的研究,虽然取得了进步,但神经功能的恢复仍不能令人满意。有研究发现:甲钴胺能促进髓鞘的主要成分——卵磷脂的合成,并且能参与神经递质乙酰胆碱（acetylcholine,ACh）合成,促进轴浆转运和轴突再生,在治疗周围神经病变特别是糖尿病方面的疗效已得到了动物实验及临床的证实,但其对神经损伤后骨骼肌及其运动终板再生恢复作用及其机制报道较少,特别是甲钴胺对神经损伤后运动终板乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）、乙酰胆碱受体（acetylcholine receptor,AChR）的变化报导较少。因此,本实验构建大鼠坐骨神经损伤模型,局部注射甲钴胺,观察不同时间神经电生理、肌肉湿重、运动终板形态、乙酰胆碱酯酶、乙酰胆碱受体的变化,探讨甲钴胺对神经损伤后运动终板恢复的促进作用,并为临床神经疾患的治疗提供理论依据。方法:实验选取成年雄性wistar大鼠（250-300g）90只,随机分成A组（甲钴胺组）、B（生理盐水对照组）两组,每组45只。通过钳夹大鼠坐骨神经制备神经损伤模型,术后约2-3小时动物意识恢复,局部注射药物。A组每日注射甲钴胺400μl /kg ,B组每日注射等量生理盐水。术后1、4、8周分别随机取A、B组大鼠各15只,测定其神经传导速度来评价神经功能,然后完整解剖分离腓肠肌用天平称其湿重。取肌组织分别行氯化金染色,光镜下观察运动终板的变化; AChE酶组织化学染色观察AChE的含量变化,并结合图像分析系统进行光密度测定; AChR荧光染色,观察乙酰胆碱受体变化;所有数据行统计学分析。结果:1,术后1周所有大鼠损伤侧足部溃疡,站立困难。神经传导速度降低,两组相比无统计学意义（P>0.05）。两组腓肠肌湿重无统计学意义（P>0.05）。两组镜下运动终板均出现退变,轴突终末分枝减少。AChE染色:AChE含量减少,两组光密度分析无统计学意义（P>0.05）。两组乙酰胆碱受体形态不完整,皱褶减少。2,术后4周A组大鼠较B组好转明显,B组,走路步态不协调。A组较B组神经传导速度有所恢复,两组相比有统计学意义（P<0.05）。腓肠肌湿重两组相比有统计学意义（P<0.05）。A组运动终板数量增加,染色较深,形态不规则。B组运动终板数量增加不明显,染色较淡,形态多呈不规则状。AChE染色:两组AChE的阳性区光密度分析有统计学意义（P<0.05）。两组乙酰胆碱受体数量增加A组形态趋于完整,B组形态仍不规则。3,术后8周A组大鼠伤口已愈合,步态协调。B组走路仍有歪斜。神经传导速度A组较B组明显恢复,两组相比有统计学意义（P<0.01）。A组与B组腓肠肌湿重统计学有明显差异（P<0.01）。A组运动终板形态与着色接近正常,B组没有明显变化。AChE染色:A组AChE活性明显高于B组,两组阳性区光密度分析有显著差异（P<0.01）。A组乙酰胆碱受体形态渐趋成熟,B组仍不规则。结论:1,甲钴胺能延缓周围神经损伤后运动终板的退变、促进运动终板再生;2,甲钴胺可以延缓神经损伤后骨骼肌湿重下降,从而延缓骨骼肌萎缩发生;3,甲钴胺能提高运动终板内的乙酰胆碱酯酶和成熟型乙酰胆碱受体的含量,对周围神经损伤后运动终板的修复有促进作用;4,甲钴胺能加快神经损伤后神经传导功能的恢复。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 1 实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要试剂
• 1.3 配方
• 1.4 主要仪器
• 2 实验方法
• 2.1 动物分组
• 2.2 模型制备
• 2.3 神经电生理测定
• 2.4 取材
• 2.5 残肌率测定
• 2.6 氯化金压片染色
• 2.7 冰冻切片制作
• 2.8 乙酰胆碱酯酶的组织化学染色
• 2.9 乙酰胆碱受体免疫荧光染色
• 2.10 统计学处理
• 3 实验结果
• 3.1 动物行为学观察
• 3.2 神经电生理测定
• 3.3 肌肉残肌率测定
• 3.4 运动终板的形态结构
• 3.5 乙酰胆碱酯酶的变化
• 3.6 乙酰胆碱受体
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述 周围神经损伤后运动终板再生的研究进展
• 缩略语表
• 攻读硕士期间发表论文
• 致谢