论文摘要
目的:①筛选三氯乙烯（TCE）致L-02肝细胞损伤相关蛋白。②研究TCE对肝细胞蛋白Rho GDIα表达的影响。方法:①收集TCE接触者血清（正常对照）、TCE中毒病人急性期和恢复期血清（均伴随严重肝损伤）。以40μmol/L TCE处理的L-02肝细胞总蛋白作为抗原来源,利用血清蛋白质组分析方法（SERPA）筛选并鉴定TCE致L-02肝损伤相关蛋白。②以DMSO和40μmol/L TCE分别对L-02肝细胞做对照和致损伤处理,提取总蛋白及总RNA,以β-actin为内参,采取western blot和实时荧光定量RT-PCR技术对分别从蛋白和mRNA水平检测Rho GDIα表达变化。结果:①建立并优化了双向电泳-免疫印迹-质谱鉴定的系统分析方法,得到高重复性、高匹配率的双向电泳图谱和免疫印迹图谱。筛选并成功鉴定了6个致L-02肝细胞损伤相关蛋白,分别为:肿瘤转移抑制基因NM23蛋白、嘌呤核苷磷酸化酶、烯酰辅酶A水合酶Ⅰ、核糖体蛋白P0、乳酸脱氢酶B和蛋白酶体激活因子PA28蛋白。②TCE处理24h后Rho GDIαmRNA表达量显著下降,蛋白含量明显升高,与比较蛋白质组分析结果一致。结论:①TCE致肝损伤患者血清中存在与TCE致肝细胞损伤相关的抗体。②血清蛋白质组分析方法鉴定的6个TCE致肝细胞损伤相关性蛋白为进一步研究TCE致肝细胞损伤机制提供了重要线索。TCE处理可以使L-02肝细胞中的Rho GDIαmRNA表达量显著下降,蛋白表达水平明显升高。
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