Caveolin-1在鼠视网膜新生血管形成中调控作用的研究

论文摘要

第一章Caveolin-1在鼠视网膜新生血管模型中的表达目的建立氧诱导视网膜新生血管小鼠模型,观察小窝蛋白-1 （caveolin-1）在正常鼠和氧诱导视网膜新生血管模型鼠视网膜中的表达,探讨caveolin-1在视网膜新生血管形成过程中的作用。方法取鼠龄7天（P7）的健康C57BL/6J小鼠（144只）随机分为模型组（72只）和正常对照组（72只）,模型组置于75%±2%氧气浓度的密闭氧舱中5天,鼠龄12天时（P12）返回正常空气环境以建立氧诱导鼠视网膜新生血管模型；正常对照组置于正常空气环境中饲养不予任何处理。模型组和正常对照组均在鼠龄17天（P17）行FITC-Dextran左心室灌注视网膜铺片,荧光显微镜下观察视网膜血管分布和形态；组织切片H&E染色观察突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量。提取不同鼠龄（P13、P15、P17）模型组和正常对照组视网膜总RNA及蛋白质,采用RT-PCR及western blot技术检测视网膜组织中caveolin-1的表达；Western blot技术检测视网膜白蛋白（albumin）含量。结果荧光造影结果显示模型组视网膜有大量新生血管形成及明显的荧光素渗漏；组织切片显示模型组有大量突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核。模型组视网膜caveolin-1 mRNA和蛋白质表达水平随缺氧时间延长而上调,于P17明显上调；同时视网膜组织中白蛋白含量逐渐增加,与caveolin-1表达呈基本相同的上升趋势,两者在时间和表达趋势上是一致的。不同鼠龄正常对照组caveolin-1 mRNA和蛋白质表达无明显变化。结论在氧诱导鼠视网膜新生血管形成过程中caveolin-1表达明显上调,其变化趋势与血-视网膜屏障破坏及视网膜新生血管形成具有时间上的一致性。caveolin-1可能参与调控视网膜新生血管形成。第二章Caveolin-1 shRNA抑制鼠视网膜新生血管的实验研究目的观察caveolin-1小发夹RNA （caveolin-1 shRNA）对血-视网膜屏障破坏和视网膜新生血管形成的抑制作用,探讨caveolin-1对视网膜新生血管的调控作用,为视网膜新生血管性疾病的治疗提供新的治疗靶点。方法取鼠龄7天（P7）的健康C57BL/6J小鼠（144只）随机分为正常对照组（36只）、模型对照组（36只）、阴性对照组（36只）和caveolin-1 shRNA注射组（36只）。正常对照组置于正常空气环境中饲养不予任何处理。模型对照组、阴性对照组和caveolin-1 shRNA注射组置于75%±2%氧气浓度的密闭氧舱中5天,鼠龄12天时（P12）返回正常空气环境以建立氧诱导鼠视网膜新生血管模型；其中,模型对照组不做任何治疗；caveolin-1 shRNA注射组在P12时予玻璃体腔注射1ul脂质体-caveolin-1 shRNA重组质粒混合物；阴性对照组在P12时玻璃体腔注射1ul脂质体-阴性对照质粒混合物。以上各组在鼠龄17天（P17）分别采用RT-PCR和western blot技术检测视网膜caveolin-1 mRNA和蛋白质表达,western blot技术检测视网膜白蛋白表达。行FITC-Dextran造影视网膜铺片方法观察血管形态变化,组织切片H&E染色观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目,结果Caveolin-1 shRNA注射组视网膜caveolin-1 mRNA和蛋白质表达分别较模型对照组下调47.94%和54.76%,差异均有统计学意义（P<0.05）；caveolin-1 shRNA注射组视网膜组织白蛋白含量较模型对照组下调56.32%,差异有统计学意义（P<0.05）；荧光造影显示：caveolin-1 shRNA注射组较模型对照组视网膜新生血管明显减少,荧光渗漏明显减轻；组织切片显示caveolin-1 shRNA注射组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目较模型对照组减少51.3%,差异有统计学意义（P<0.01）。结论Caveolin-1 shRNA可以有效地抑制视网膜血管白蛋白渗漏,并抑制视网膜新生血管形成,进一步证明了caveolin-1在视网膜新生血管发生中的调控作用,为视网膜新生血管性疾病的治疗提供了新的靶点。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 中英文对照
• 前言
• 第一章 Caveolin-1在鼠视网膜新生血管模型中的表达
• 1.1 材料与方法
• 1.1.1 主要试剂和材料设备
• 1.1.2 实验方法
• 1.1.3 统计学分析
• 1.2 结果
• 1.2.1 视网膜新生血管的病理学形态
• 1.2.2 突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数
• 1.2.3 不同时间点正常对照组和模型组视网膜白蛋白表达
• 1.2.4 不同时间点正常对照组和模型组视网膜caveolin-1表达
• 1.3 讨论
• 1.3.1 氧诱导鼠视网膜新生血管模型（OIR）
• 1.3.2 血-视网膜屏障
• 1.3.3 caveolin-1表达变化的意义
• 1.4 小结
• 第二章 Caveolin-1 shRNA抑制鼠视网膜新生血管的实验研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 主要试剂和材料设备
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.3 统计学分析
• 2.2 结果
• 2.2.1 绿色荧光蛋白在小鼠视网膜中的表达
• 2.2.2 不同实验组视网膜caveolin-1 mRNA的表达
• 2.2.3 不同实验组视网膜caveolin-1蛋白质的表达
• 2.2.4 不同实验组视网膜白蛋白的表达
• 2.2.5 不同实验组小鼠的视网膜血管形态变化
• 2.2.6 不同实验组小鼠突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核计数
• 2.3 讨论
• 2.3.1 RNA干扰与基因转染
• 2.3.2 Caveolin-1 shRNA对血-视网膜屏障和视网膜新生血管的调控
• 2.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 综述 Caveolae/caveolin-1与血管通透性
• 参考文献
• 致谢
• 攻读博士学位期间发表的学术论文及科研情况