论文摘要
目的：使用不同浓度的苦参碱对人胎肝细胞的冻存过程进行干预，观察胎肝细胞ALB、ALT、LDH及p38MAPK和JNK通路的表达，明确苦参碱对人胎肝细胞冻存的保护作用，并从分子水平探讨其作用机制。为肝细胞的高效冻存方法提供新思路，为生物型反应器的构建、肝细胞库的建立及肝细胞移植提供依据。方法：本实验将5组不同浓度的苦参碱加入人胎肝细胞的传统冻存液中进行超低温冻存。同时设立一组常规冻存方法组为对照组。对复苏后的人胎肝细胞进行ALB、ALT、LDH检测，比较冻存前后肝细胞功能状况。检测冻存前后苦参碱组及常规方法冻存组肝细胞的存活率。并采用免疫印迹法(WesternBlot法)检测人胎肝细胞冻存前后p38MAPK和JNK通路的表达。结果：除64mg／L组外，各苦参碱冻存组复苏后的胎肝细胞的活力、贴壁情况、ALB、ALT、LDH的表达均优于对照组。其中8mg／L组效果最好，有明显统计学意义(P＜0.01)。利用免疫印迹法观察到复苏后的各组人胎肝细胞p38M APK和JNK的含量均比冻存前增加，冻存液中加入苦参碱后，复苏后p38M APK和JNK的含量均比对照组有所下降，8mg／L组尤为明显，有明显统计学意义(P＜0.01)，结果提示冻存增加肝细胞JNK和p38MAPK的表达，而加入苦参碱后，JNK和p38M APK的表达明显比对照组下降，提示苦参碱对人胎肝细胞的保护作用可能是通过抑制JNK和p38MAPK的转导通路激活来完成。然而，64mg／L组无论肝细胞的活性、功能、p38MAPK和JNK表达都差于对照组，提示苦参碱对胎肝细胞冻存的保护作用可能有剂量依赖性，64mg／L组可能抑制p38MAPK和JNK通路的表达。结论：一定浓度的苦参碱对冻存人胎肝细胞有较好的保护作用，其中8mg／L组效果最好。苦参碱对冻存人胎肝细胞的保护作用有剂量依赖性，苦参碱浓度增加至64mg／L时，对冻存人胎肝细胞可能有抑制作用。苦参碱可能是通过抑制JNK和p38MAPK转导通路来保护人胎肝细胞对抗超低温冻存时对细胞的损伤。
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