论文摘要
目的体外构建糖皮质激素诱导大鼠骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stemcells, BMSCs）损害的实验模型，观察糖皮质激素对大鼠BMSCs的损害情况；探讨淫羊藿苷（Icariin, ICA）联合四环素对糖皮质激素所致大鼠BMSCs损害的保护作用。方法大鼠BMSCs分离与体外培养，构建糖皮质激素损害细胞模型。实验分组：正常对照组、激素对照组（地塞米松浓度10-8mol/L）、淫羊藿苷组（淫羊藿苷浓度为20ng/ml的含激素培养基）、四环素组（四环素浓度为100μg/ml的含激素培养基）、淫羊藿苷联合四环素组（淫羊藿苷浓度为20ng/ml+四环素浓度为100μg/ml的含激素培养基）。用MTT法观察各组不同时间点的OD值，测定细胞生存率并绘制细胞生长曲线。吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色检测各组细胞凋亡情况。免疫组织化学法分析细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达。蛋白免疫印迹（Western blotting）分析细胞凋亡蛋白Caspase-3表达。结果MTT结果示：联合应用组与其它组相比较，联合应用组保护作用比其它组更强，组间差异具有统计学意义（p﹤0.05）。吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色结果示：联合应用组与其它组相比较细胞凋亡率下降，组间差异具有统计学意义（p<0.05）。免疫组化结果示：联合应用组与其它组相比较抑制凋亡的蛋白Bcl-2表达增加、促进凋亡的蛋白Bax表达降低，组间差异具有统计学意义（p﹤0.05）。蛋白免疫印迹结果示：联合应用组凋亡蛋白Caspase-3表达与其它组相比较表达降低，组间差异有统计学意义（p﹤0.05）。结论糖皮质激素可以抑制大鼠BMSCs体外的增殖，此种抑制呈现浓度和时间依赖性。ICA联合四环素能够降低激素抑制BMSCs增殖的作用，并能抑制激素诱导细胞凋亡的作用。ICA联合四环素具有保护激素损害BMSCs的作用，这为早期干预治疗激素性骨坏死提供了实验药理依据。
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