肌肽对DNA氧化损伤的作用及其机制的研究

论文摘要

DNA是生命的遗传物质,DNA的损伤引发多种疾病。因此寻求有效的、天然的保护DNA的药物具有重要的理论价值和实际意义。肌肽是由L-组氨酸和β-丙氨酸组成的二肽,是一种存在于动物体内的具有多种功效的天然抗氧化剂。本论文采用TBA法,化学发光法测定了肌肽在四种不同体系中对DNA氧化损伤的作用。这四种体系为:1、phen-Cu2+-VitC体系,2、BLMA5-Fe2+体系,3、VitC-Fe2+体系,4、phen-Cu2+-VitC-H2O2体系。设常用抗氧化剂甘露醇、苯甲酸钠、二甲基亚砜做对照,比较了它们抗氧化能力的强弱,并检测了肌肽的组成成分L-组氨酸、β-丙氨酸、咪唑在这四种不同体系中对DNA损伤的作用,绘制了抑制动力学曲线,希望通过这几种物质抗氧化行为动力学曲线的比较,找出肌肽对DNA氧化损伤作用的保护机制。体系Ⅰ利用phen-Cu2+-VitC体系产生OH,对DNA造成损伤,采用TBA法测定了加入5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L四种浓度的肌肽后体系512nm光吸收值。结果表明肌肽对由phen-Cu2+-VitC体系引起的DNA损伤有明显的抑制作用（P<0.05）,且随着肌肽浓度的增大,对DNA损伤的抑制作用增强。20mmol/L时,与β-丙氨酸、甘露醇、苯甲酸钠、二甲基亚砜相比,肌肽的抗氧化活性显著高与甘露醇等抗氧化剂（p<0.05）;与L-组氨酸相比没有显著差异且肌肽的抗氧化动力学曲线与L-组氨酸相似。在phen-Cu2+-VitC体系中肌肽等物质对脱氧核糖的损伤没有显著的差异（P>0.05）。体系Ⅱ用BLMA5-Fe2+体系对DNA造成损伤,用TBA法检测了加入肌肽、甘露醇等抗氧化剂后DNA在该体系中损伤程度的变化。结果表明,肌肽、L-组氨酸浓度小于8mmol/L时对DNA损伤具有明显的促氧化作用,浓度大于此浓度时对DNA损伤的抑制率显著增高,抗氧化活性大于甘露醇等常用抗氧化剂（p<0.05）。肌肽的抗氧化动力学曲线与L-组氨酸相似。在本实验过程中我们还观察到博莱霉素对脱氧核糖不切割(OD532值0.056)。体系Ⅲ以VitC-Fe2+系统产生过氧化氢和羟自由基对DNA造成氧化损伤产生MDA物质为基础,采用TBA法在脱氧核糖水平上检测肌肽对DNA氧化损伤的作用。设咪唑,L-组氨酸,β-丙氨酸,甘露醇,苯甲酸钠,二甲基亚砜为对照,对它们抗氧化能力的强弱做了比较,并对其抗氧化机理做了初步探讨,结果发现在本实验条件下肌肽对DNA损伤有明显的抑制作用（p<0.01）,且随着肌肽浓度的增大抗DNA损伤的能力增强。10mmol/L时肌肽在VitC-Fe2+系统中对DNA损伤的抑制率为78.38%,而苯甲酸钠为1.88%,甘露醇为18.98%,肌肽的抗氧化能力明显优于苯甲酸钠等常用抗氧化剂（p<0.01）。其抗氧化动力学曲线与咪唑相似,提示其抗氧化机理与咪唑环有关。在该体系中苯甲酸钠浓度较低时对DNA和脱氧核糖都有轻微的促氧化作用。肌肽、、咪唑、甘露醇、L-组氨酸、β-丙氨酸对脱氧核糖损伤有显著的保护作用（p<0.01）体系Ⅳ采用化学发光法检测了在Phen-Cu2+-VitC-H2O2-DNA系统中加入肌肽、L-组氨酸、

论文目录

摘要

1 文献综述

1.1 肌肽

1.1.1 肌肽的历史

1.1.2 肌肽的生理功能

1.2 自由基

1.2.1 自由基的产生

1.2.2 自由的危害

1.2.3 自由基的作用

1.2.4 自由基的测定方法

1.3 常见抗氧化剂的种类及其作用机制

1.3.1 内源性抗氧化剂

1.3.2 中草药

1.3.3 维生素

1.3.4 微量元素

1.3.5 合成抗氧化剂

2 引言

3 材料与方法

2+-VitC系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用'>3.1 体系Ⅰphen—Cu²⁺-VitC系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用

3.1.1 试剂、仪器

3.1.2 实验方法

3.1.3 数据分析

5-Fe²⁺系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用'>3.2 体系ⅡBLMA₅-Fe²⁺系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用

3.2.1 试剂、仪器

3.2.2 实验方法

2+系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用'>3.3 体系ⅢVitC-Fe²⁺系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用

3.3.1 试剂、仪器

3.3.2 实验方法

3.4 体系Ⅳ化学发光发检测肌肽的抗氧化活性

3.4.1 试剂、仪器

3.4.2 化学发光体系的建立

3.4.3 实验方法

4 结果与分析

2+-VitC系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用'>4.1 体系Ⅰphen-Cu²⁺-VitC系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用

4.1.1 肌肽等抗氧化剂对DNA氧化损伤的影响

4.1.2 肌肽等抗氧化剂对脱氧核糖氧化损伤的影响

5-Fe²⁺系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用'>4.2 体系ⅡBLMA₅-Fe²⁺系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用

2+系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用'>4.3 体系ⅢVitC-Fe²⁺系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用

4.3.1 肌肽等抗氧化剂对DNA氧化损伤的影响

4.3.2 肌肽等抗氧化剂对脱氧核糖氧化损伤的影响

4.4 体系Ⅳ化学发光发检测肌肽的抗氧化活性

4.4.1 化学发光体系的建立

4.4.1.1 温度的影响

4.4.1.2 Phen浓度的影响

2+浓度的影响'>4.4.1.3 Cu²⁺浓度的影响

4.4.1.4 VitC浓度的影响

2O₂浓度的影响'>4.4.1.5 H₂O₂浓度的影响

4.4.1.6 DNA浓度的影响

2+-VitC系统中DNA的降解发光'>4.4.2 phen-Cu²⁺-VitC系统中DNA的降解发光

4.4.3 肌肽对DNA损伤产物发光动力学的影响

4.4.4 肌肽与甘露醇的比较

5 讨论

2+-VitC系统中肌肽对DNA损伤的作用'>5.1 体系Ⅰphen-Cu²⁺-VitC系统中肌肽对DNA损伤的作用

5.1.1 OH的产生体系

5.1.2 DNA链的降解

5.1.3 肌肽的保护作用

5-Fe²⁺系统中肌肽对DNA损伤的作用'>5.2 体系ⅡBLMA₅-Fe²⁺系统中肌肽对DNA损伤的作用

5.2.1 DNA链的降解

5.2.2 肌肽的作用

2+系统中对DNA损伤的作用'>5.3 体系ⅢVitC-Fe²⁺系统中对DNA损伤的作用

5.3.1 DNA链的降解

5.3.2 肌肽对DNA的作用

5.4 体系Ⅳ化学发光法检测肌肽对DNA氧化损伤的作用

2+-VitC-H₂O₂-DNA系统中DNA的可能降解发光过程'>5.4.1 phen-Cu²⁺-VitC-H₂O₂-DNA系统中DNA的可能降解发光过程

5.4.2 肌肽对DNA损伤的作用

6 结论

参考文献

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