论文题目: 凝血酶激活的纤溶抑制剂与水蛭素对纤溶的影响
论文类型: 博士论文
论文专业: 发酵工程
作者: 唐瑜菁
导师: 金坚
关键词: 凝血酶激活的纤溶抑制剂,马铃薯羧肽酶抑制剂,纤溶,组织型纤溶酶原激活剂,尿激酶,水蛭素
文献来源: 江南大学
发表年度: 2005
论文摘要: 随着我国人口结构的老龄化和人民生活水平的提高,心脑血管疾病已成为威胁人类健康的一大杀手,心肌梗塞、脑中风等血栓性疾病的发病率正逐年提高。溶栓药物是治疗血栓性疾病的主要措施,但目前临床用于治疗这类疾病的药物还存在多种缺陷,如出血、缺血心肌没有明显再灌注,以及溶栓治疗后的再栓塞等。因此,确定新的治疗靶,以及对高效、安全的溶栓剂的研制具有重要意义。本文围绕抗凝促纤溶药物水蛭素和可能的药物靶TAFI及TAFIa进行研究,主要研究结果及结论如下:1.为了获得满足研究需要的高纯度马铃薯羧肽酶抑制剂(CPI),采用HPLC/ESI-MS色质联用技术对购自Sigma公司的CPI样品中的主要杂质进行了定性和定量分析,确定其中主要杂质之一为龙葵素。在此基础上建立了CPI的反相柱层析分离纯化方法,对CPI样品进行了分离纯化及活性鉴定,获得了较高纯度的样品。2.以尿激酶为纤溶酶原激活剂的体外纤溶实验,证明了水蛭素不但有抗凝作用,而且具有明显的间接促纤溶作用;发现水蛭素的抗凝和促纤溶效果均优于肝素。其最主要原因是水蛭素能有效抑制结合在纤维蛋白或血小板表面的凝血酶,从而抑制了纤溶诱发的血栓形成,降低了尿激酶和纤溶酶原的短暂性耗竭。在此过程中,水蛭素对TAFI活化的部分抑制也是其促纤溶的原因之一。3.通过比较内皮细胞处理血浆和加TM血浆TAFIa活性的异同,表明结合在内皮细胞表面的TM有可能通过TM-凝血酶途径激活TAFI而在凝血与纤溶过程中发挥调节作用。TAFI的活化对纤溶影响明显,不仅造成纤溶产物D-dimer生成量明显减少,而且可以推迟纤溶的启动并明显延长纤溶时间。4.体外研究发现CPI抑制TAFIa的促纤溶作用在一定浓度范围内随着tPA浓度的增高而增强证明了TAFIa抑制剂结合低剂量溶栓剂、抗凝剂溶栓治疗的可行性。体外内纤溶实验TAFIa活性的抑制程度与纤溶时间和纤溶的启动时间呈负相关;小剂量tPA结合抑制TAFIa活性,可大大减少tPA的使用剂量,达到相同的纤溶效果。这些结果提示抑制TAFIa可能在易栓症病人微血栓预防方面更有价值,TAFIa可能是新的、安全有效的抗栓药物的攻击靶。
论文目录:
英文缩略词
摘要
Abstract
第一章 绪论
1.1 心脑血管疾病
1.2 心脑血管疾病的病因
1.3 心脑血管疾病的治疗
1.3.1 溶栓药物
1.3.2 溶栓治疗现状
1.4 凝血酶激活的纤溶抑制剂
1.4.1 TAFI 的发现与命名
1.4.2 TAFI 的分子结构及生物学特性
1.4.3 TAFI 对凝血与纤溶的调控
1.5 水蛭素
1.6 立题背景与本文的研究内容
1.6.1 立题意义
1.6.2 本文主要研究内容
参考文献
第二章 马铃薯羧肽酶抑制剂的分离纯化
2.1 引言
2.2 材料
2.2.1 主要仪器
2.2.2 主要试剂
2.2.3 主要溶液的配制
2.3 方法
2.3.1 CPI 样品的高效液相色谱-电喷雾电离质谱(HPLC/ESI-MS)色质联用分析
2.3.2 CPI 样品中的龙葵素的定量分析
2.3.3 制备型C_8反相色谱柱分离纯化CPI
2.3.4 CPI 活性测定
2.3.5 CPI 促纤溶作用测定
2.4 结果与讨论
2.4.1 CPI 样品的高效液相色谱分析
2.4.2 CPI 样品的高效液相色谱分离峰的质谱分析
2.4.3 CPI 样品中龙葵素的定量测定
2.4.4 CPI 的分离纯化
2.4.5 CPI 的纯度检查
2.5 小结
参考文献
第三章 水蛭素促纤溶机理研究
3.1 引言
3.2 材料
3.2.1 主要仪器
3.2.2 主要药品和试剂
3.3 方法
3.3.1 采血及血浆准备
3.3.2 纤溶试验
3.3.3 内纤溶试验
3.3.4 TAFI 活化的测定
3.3.5 统计方法
3.4 结果与讨论
3.4.1 水蛭素和肝素促纤溶作用的对比
3.4.2 水蛭素和肝素对血浆内纤溶作用的影响
3.4.3 水蛭素和肝素对 TAFI 活化的影响
3.4.4 讨论
3.5 小结
参考文献
第四章 TAFI 与凝血和纤溶系统的关系研究
4.1 引言
4.2 材料
4.2.1 主要仪器
4.2.2 主要药品和试剂
4.3 方法
4.3.1 柠檬酸钠抗凝血浆准备
4.3.2 血清的制备
4.3.3 uPA 血浆的制备
4.3.4 微血管内皮细胞处理血浆的制备
4.3.5 内纤溶试验
4.3.6 TAFI 含量的测定
4.3.7 TAFI 分子量分布测定
4.3.8 TAFIa 活性测定
4.3.9 统计方法
4.4 结果与讨论
4.4.1 抗凝血浆、血清、uPA 血浆中 TAFI 分子量分布
4.4.2 加 TM 血浆和 HMEC 处理血浆纤溶过程中 TAFIa 的测定
4.4.3 TM、HMEC 处理对内纤溶产物D-Dimmer 生成的影响
4.4.4 TM、HMEC 处理对内纤溶时间的影响
4.4.5 凝血过程中血浆 TAFI 总含量的变化
4.5 小结
参考文献
第五章 TAFIa 作为抗血栓药物靶的可行性研究
5.1 引言
5.2 材料
5.2.1 主要仪器
5.2.2 主要药品和试剂
5.3 方法
5.3.1 采血及血浆准备
5.3.2 去纤维蛋白血浆的制备
5.3.3 内纤溶试验
5.3.4 纤溶试验
5.3.5 统计方法
5.4 结果与讨论
5.4.1 抑制TAFIa 活性对抗凝条件下纤溶的影响
5.4.2 抑制TAFIa 对内纤溶试验纤溶时间的影响
5.4.3 TAFIa 不同抑制程度对内纤溶的影响
5.4.4 水蛭素对TAFIa 抑制剂促纤溶作用的影响
5.4.5 讨论
5.5 小结
参考文献
论文主要结论
论文创新点
致谢
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发布时间: 2006-07-20
参考文献
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