论文摘要
目的1观察恩度、恩度与顺铂联合应用对宫颈癌Hela细胞裸鼠移植肿瘤生长及转移的影响。2观察恩度对宫颈癌Hela细胞裸鼠移植肿瘤的血管新生、淋巴管新生的抑制作用及对肿瘤细胞超微结构的影响。3检测恩度对宫颈癌Hela细胞裸鼠移植肿瘤的血管内皮生长因子-A,C,D（VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D）表达情况的影响。方法1荷瘤裸鼠模型的建立雌性5～6周龄的裸鼠饲养在清洁级环境中,常规收取表达荧光素酶的Hela细胞（精诺真公司惠赠）,制备细胞悬液（2.5×107/ml）。抽取0.2ml细胞悬液（5×106）接种在裸鼠左侧肋腹部皮下,一般到接种后4天出现肉眼可见的肿瘤,模型建立成功。2实验分组待皮下肿瘤生长到长径约0.7cm时,将裸鼠随机分为五组,每组8只。五组分别为:对照组（生理盐水组）、顺铂组、恩度组（10mg/kg）、小剂量恩度（10mg/kg）联合顺铂组、大剂量恩度（20mg/kg）联合顺铂组。恩度隔1日瘤周皮下给药一次,顺铂隔3日腹腔给药一次,疗程4周。3移植肿瘤生长情况的检测应用“精诺真体内成像系统”测量肿瘤的发光光子总数。待裸鼠皮下肿瘤生长到长径约0.7cm时,开始照相。在照相前,每只裸鼠腹腔内注射荧光素（150mg/kg）,注射15分钟以后,应用异氟烷麻醉。麻醉成功后,将裸鼠放入成像装置,调整好体位,照相。之后每周照相一次。4治疗4周后,应用麻醉药水合氯醛处死裸鼠。取出肿瘤组织,称重后按照不同的用途处理肿瘤组织,一部分用作光镜标本应用4%多聚甲醛固定,一部分用作电镜标本应用4%戊二醛固定。5分别用CD34作为血管标记物,LYVE-1作为淋巴管标记物,采用免疫组织化学法检测移植瘤的微血管密度和微淋巴管密度。免疫组织化学法分别检测移植瘤中VEGF-A, C, D的表达情况。6透射电镜观察裸鼠肿瘤细胞超微结构的变化。结果1恩度对裸鼠移植瘤生长情况的影响应用“精诺真体内成像系统”评价裸鼠肿瘤的活性,根据每次测量的光子数绘制肿瘤生长曲线,了解肿瘤的生长、变化情况。到实验结束时,我们发现恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组光子数比单用顺铂组和生理盐水组明显减少（P<0.05）,但是恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组之间没有差异（P >0.05）。2恩度对裸鼠一般情况的影响用药物后顺铂组裸鼠活动明显减少,饮食量下降,体重减轻,持续到实验结束。生理盐水组、恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组裸鼠体重一直持续增长至实验结束。3恩度对裸鼠淋巴结转移的影响实验结束,解剖裸鼠时在肿瘤的附近可以发现淋巴结转移。石蜡切片HE染色证实为癌转移。大剂量恩度联合顺铂组、小剂量恩度联合顺铂组、恩度组、顺铂组、生理盐水组裸鼠肿瘤淋巴结转移率分别为0%（0/8）、12.5%（1/8）、12.5%（1/8）、62.5%（5/8）、75%（6/8）。恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组淋巴结转移率比单用顺铂组和生理盐水组明显降低（P<0.05）。4恩度对裸鼠肿瘤微血管密度（MVD）的影响以CD34作为血管内皮细胞的标志物,血管内皮细胞的胞浆被染成棕黄色。大剂量恩度联合顺铂组、小剂量恩度联合顺铂组、恩度组、顺铂组、生理盐水组裸鼠肿瘤MVD平均值分别为10.88±1.38、10.25±1.22、10.83±2.29、15.58±2.31、22.08±1.93。恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组MVD与单用顺铂组和生理盐水组差异有统计学意义（P<0.05）。恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组之间差异无统计学意义（P>0.05）。5恩度对裸鼠肿瘤微淋巴管密度（MLD）的影响以LYVE-1作为淋巴管内皮细胞的标志物,淋巴管内皮细胞的胞浆被染成棕黄色。大剂量恩度联合顺铂组、小剂量恩度联合顺铂组、恩度组、顺铂组、生理盐水组裸鼠肿瘤MLD平均值依次为5.00±0.63、5.17±0.75、6.00±0.63、14.33±1.63、13.67±1.21。恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组MLD与单用顺铂组和生理盐水组比较有统计学差异（P<0.05）。恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组之间无统计学差异（P>0.05）。6恩度对裸鼠肿瘤表达VEGF-A, C, D的影响VEGF-A, C, D均表达在肿瘤细胞的细胞质中,显示为棕黄色的颗粒。恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组VEGF-A, C, D的表达均较生理盐水组和顺铂组明显降低（P<0.05）。恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组之间无统计学差异（P>0.05）。7透射电镜的观察结果恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组的裸鼠肿瘤细胞均发现有凋亡细胞,而在生理盐水组和顺铂组内可见大量变性坏死的细胞,未见凋亡细胞。结论1单用恩度、恩度联合顺铂抑制Hela裸鼠皮下移植瘤的生长和淋巴结转移的作用优于顺铂。2恩度能够抑制Hela裸鼠皮下移植瘤的血管新生和淋巴管新生,诱导肿瘤细胞凋亡。3恩度通过降低Hela裸鼠皮下移植瘤细胞VEGF-A, C, D的表达而抑制脉管新生。4恩度能够减轻传统化疗药物的副作用,有望成为宫颈癌治疗的有效药物。
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