张艳华(黑龙江省七煤医疗中心朝阳医院154600)
【中图分类号】R185【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)5-0449-02
【摘要】目的探讨高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的临床检测的方法及其意义。结论HDL的浓度和冠心病发生率之间成负相关，它可以促进和加速胆固醇从细胞和血管壁清除以及将它们运送到肝脏。HDL是一种和总胆固醇浓度无关的危险因素，而且有很高的预期价值。HDL胆固醇浓度的测定对冠心病危险的评估是必需的。HDL胆固醇的浓度受吸烟、锻炼、药物、性别和年龄的影响。
【关键词】高密度脂蛋白胆固醇临床检测意义
高密度脂蛋白(HDL)是血清中颗粒数最多而且很不均一的一组脂蛋白，按其密度高低主要分为HDL2与HDL3两个亚组分，临床一般只测定总HDL，也可以分别测定其亚类。因为HDL组成中含蛋白质与脂质各半，脂质中主要是胆固醇与磷脂，磷脂测定比较麻烦，通常以测定胆固醇含量(HDL-C)代表HDL水平。HDL-C测定参考方法为用超速离心分离HDL，然后用化学法(ALBK法)或酶法测定其胆固醇含量。20世纪70年代出现不少多阴离子沉淀法，称直接测定法，有肝素Mn法、磷钨酸(PTA)-镁离子法、硫酸葡聚糖(DS)-镁离子法和聚乙二醇(PEG)6000法等。此类方法操作相对简便，被临床实验室用作常规测定。其中硫酸葡聚糖(DS)-镁离子法和聚乙二醇(PEG)6000法应用最为广泛。
1临床资料
1.1一般资料选用本院住院门诊病人的样品，早晨空腹取血，自行凝固后离心分离血清，当天或1周内完成(标本－20℃保存)。现将检验分析报告如下。
2方法
2.1磷钨酸-镁沉淀法
2.1.1．原理血清HDL不含apoB，临床检验中大都用大分子多阴离子化合物与两价阳离子沉淀含apoB的脂蛋白[包括LDL、VLDL、IJP(a)]，本法中用磷钨酸与镁离子作沉淀剂，其上清液中只含HDL，其胆固醇含量用酶法测定(同酶法测TC)。
2.1.2．试剂
(1)沉淀剂：称取PTA0．44g与MgCl2?6H2O1．10g(均用分析纯试剂)，溶于80ml蒸馏水中，以1mol／LNaOH液校pH至6．15(约用1．3ml)，然后以蒸馏水加至100ml，此试剂至少稳定1年。
(2)酶试剂：同TC测定。
(3)参考血清：低Chol的定值血清，或将TC测定用定值血清适当稀释(1：2或1：3)后用。
2.1.3．操作
(1)用早晨空腹(12小时)血，当天测定。如需冷冻保存，只能冻1次，化冻后立即测定。
(2)于小离心管中加血清200μl，沉淀剂200μl，充分混匀，室温放置10分钟后离心(3000转／分钟，15分钟)，吸取上清液测Chol。
2.1.4．计算HDL-C(mmol／L)=测定管A／标准管A×定值血清浓度Chol(mmol／L)。
2.1.5．临床意义
(1)流行病学与临床研究证明，HDL-C与冠心病发病成负相关，HDL-C低于0．9mmol／L是冠心病危险因素，HDL-C增高(>1．55mmol／L，即60mg／d1)被认为是冠心病的“负”危险因素。HDL-C下降也多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化等患者。高TG血症往往伴以低HDL-C。肥胖者HDL-C也多偏低。吸烟可使HDL-C下降，饮酒及长期体力活动会使HDL-C升高。
(2)在生理与病理情况下，HDL-C水平的变动往往由于HDL2-C的变化，而HDL3-C的变化较小。多数报道认为冠心病患者HDL2-C下降比HDL3-C明显，但也有不同的报道。肝病患者HDL-C下降主要是HDL3-C部分下降。
2.2硫酸葡聚糖Mg沉淀法
2.2.1．原理硫酸葡聚糖Mg沉淀法，为CDC指定的比较方法。其原理是，以硫酸葡聚糖DS50(MW50000±5000)与Mg2+沉淀血清中含apoB的脂蛋白[LDL、VLDL、LP(a)]，测定上清液中的HDL-C。
HDL是颗粒大小及组成很不均一的脂蛋白，主要包括HDL2,HDL3亚组分(HDLl很少)，适量增加DS50和Mg2+浓度，可使血清中的HDL2随含apoB的脂蛋白同时沉淀，离心后上清液中只含HDL3，故可测出HDL3-C。总HDL-C与HDL3-C之差即为HDL2-C。
2.2.2．试剂
(1)DS沉淀试剂：称取DSS0(法国Sochibo出品)1．0g、MgCl2?6H2O10．16g及NaN350mg，溶于去离子水中，定量至100ml，此试剂在室温中至少可稳定1年。
(2)胆固醇测定试剂：同AL-BK法TC测定。
2.2.3．操作
(1)取血清0．5ml与DS沉淀剂50μl混合，放置室温5～30分钟，离心12000g5分钟或1500g30分钟。上清液供胆固醇ALBK法测定。
(2)如离心后上层血清混浊，表示含apoB的脂蛋白沉淀不完全，可用0．22μm孔径滤膜过滤，或将血清用生理盐水做l：1稀释后重新测定。
2.2.4．计算HDL-C(mmol／L)=测定管A／标准管A×校准血清的胆固醇浓度×1．1(加沉淀剂的稀释因数)。
2.3匀相测定法
2.3.1．原理(1)PEG修饰酶法(PEG法)：CM、VLDL、LDL+α-环状葡聚糖硫酸盐+Mg2+→CM、VLDL、LDL和α-环状葡聚糖硫酸盐的可溶性聚合物。HDL-C+PEG修饰的CEH和COD→胆甾烯酮+H2O2。H2O2+酚衍生物+4-AAP+POD→苯醌亚胺色素。
(2)选择性抑制法(SPD法)：CM、VLDL和LDL+多聚体阴离子+多聚体→CM、VLDL、LDL和多聚阴离子生成聚合物并被多聚体掩蔽。HDL-C+表面活性剂+CEH和COD→胆甾烯酮+H2O2。
(3)抗体法(AB法)：CM、VLDL和LDL+抗apoB抗体→CM、VLDL、LDL和抗lapoB抗体的聚合物。HDL-C+CEH和COD→胆甾烯酮+H2O2。
（4）过氧化氢酶法(CAT法)：CM、VLDL、LDL+选择性试剂+CEH和COD→胆甾烯酮+H2O2；H2O2+过氧化氢酶→2H2O+O2。HDL-C+CEH和COD+过氧化酶抑制剂→胆甾烯酮+H2O2。
2.3.2．试剂
(1)试剂1：MOPS缓冲液30mmol／L，pH7．0；α-环状葡聚糖硫酸盐0．5mmol／L；硫酸葡聚糖0．5g/L；MgCl22mmol／L；EMSE0．3g／L。
(2)试剂2：MOPS缓冲液30mmol／L，pH7．0；PEG修饰胆固醇酶1．0U／L；PEG修饰胆固醇氧化酶5．0kU／L；辣根过氧化物酶30kU／L；4-AAP0．5g/L。
注：EMSE：N-乙基-N-(3-甲基苯基)-N-琥珀酰乙二胺。
(3)校准物：定值人血清。
2.3.3．操作自动分析参数：
测定方法：二点终点法；反应温度：37℃；波长：600nm(主)／700nm(次)。
2.3.4．参考值
(1)男性：1．16～1．42mmol／L(45～55mg／d1)。
(2)女性：1．29～1．55mmol／L(50～60mg／d1)。
(3)正常人HDL-C占TC的25％～30％。
我国《血脂异常防治建议》提出的判断标准：理想范围>1．04mmol／L(>40mg／d1)，降低<0．9lmmmol／L(<35mg／d1)。NCEP，ATPⅢ提出的医学决定水平：①<1．03mmol／L(40mg／d1)为降低，CHD危险增高；②≥1．55mmol／L(60mg／d1)为负危险因素。
ATPIII将HDL-C从原来的<35mg/L(0．9mmol／L)提高到<40mg／L(1．03mmol／L)是为了让更多的人得到预防性治疗(男性将从原来的15％提高到约40％，女性从原来的5％提高到15％的人群被划归高危人群)。
参考文献
[1]李清华，等.对高密度脂蛋白胆固醇直接测定法的评价.临床检验杂志.1998，16∶269.
[2]刘淑梅、蔡英秋.血清胆固醇与高密度脂蛋白胆固醇比值在冠心病检测中的意义［Ｊ］.北京医学，2000，22（5）：273,302
[3]李闻捷.是HDL还是HDL-C有抗动脉粥样硬化作用［Ｊ］．临床检验杂志，2004，22（3）：238239
[4]直接法测定高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂性能评价--《江西医学检验》2007年05期