RNA干扰HIF-1α对宫颈癌细胞基质金属蛋白酶-2表达影响的研究

论文摘要

目的缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1alpha, HIF1-α）是普遍存在于实体瘤组织中的缺氧应答调控因子,在维持细胞能量代谢、肿瘤血管生成、肿瘤细胞转移、细胞增殖与凋亡等诸多方面起着重要作用。本研究探讨RNA干扰HIF-1α对基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）在子宫颈癌HeLa细胞中表达的影响,初步探讨其机理。方法1将15只裸鼠随机分为三组,空白对照组用HeLa细胞接种,阴性对照组用pGenesil-1-HeLa细胞接种,实验组用HIF-1α-HeLa细胞接种;2用免疫组织化学法检测各组移植瘤组织中HIF-1α,上皮细胞钙粘蛋白（E-cadherin）,钙紧张素（β-catenin）和MMP-2的表达;3将HeLa细胞,转染pGenesil-1空白质粒的HeLa细胞（pGenesil-1-HeLa细胞）、转染HIF-1α-shRNA质粒的HeLa细胞（HIF-1α-HeLa细胞）分别在乏氧条件下（1 % O2）及常氧（21 % O2）条件下培养48 h,用western blot法检测各组细胞中HIF-1α、E-cadherin、β-catenin和MMP-2的表达。结果1免疫组化法分析各组移植瘤组织中HIF-1α,E-cadherin,β-catenin和MMP-2的表达,空白对照组分别为（69.0±12.1） %,（17.0±3.6） %,（56.0±7.9） %,（60.0±5.0） %;阴性对照组分别为（62.8±12.3） %,（19.0±5.9） %,（53.0±6.9） %,（58.0±7.4） %;实验组分别为（17.4±8.8） %,(51.0±9.9 %,（24.0±2.6） %,（23.0±4.6） %;2三种细胞中HIF-1α与MMP-2的表达存在正相关性,相关系数r =0.521 （P =0.035）;3 western blot分析,HeLa细胞和pGenesil-1-HeLa细胞乏氧48 h时HIF-1α,β-catenin,MMP-2蛋白高表达,而E-cadherin蛋白低表达,HIF-1α-HeLa细胞在乏氧和常氧48 h时β-catenin和MMP-2蛋白低表达,而E-cadherin蛋白高表达,HeLa细胞、pGenesil-1-HeLa细胞和HIF-1α-HeLa细胞在常氧48 h时及HIF-1α-HeLa细胞在乏氧48 h时HIF-1α蛋白低表达。结论在人宫颈癌HeLa细胞中干扰HIF-1α后MMP-2的表达下降,两者存在正相关性,可能与E-cd/cat复合物有关。

论文目录

• 一 总论
• 1 中文摘要
• 2 英文摘要
• 3 中英文词汇对照表
• 4 前言
• 二 材料和方法
• 1 材料
• 2 方法
• 3 动物模型的建立、分组和处理
• 4 石蜡标本的制作
• 5 从细胞中提取蛋白
• 6 免疫组化法检测各组移植瘤组织中 HIF-1α, E-cadherin, β-catenin 和 MMP-2 的表达
• 7 western blot 法分析各组细胞在常氧和缺氧下培养 48 h 时 HIF-1α, E-cadherin, β-catenin 和 MMP-2 的表达情况
• 8 统计学分析
• 三 结果
• 1 实验动物分组
• 2 免疫组化法检测三组移植瘤组织 HIF-1α, E-cadherin, β-catenin 和 MMP-2 的表达
• 3 各组细胞移植瘤组织中 HIF-1α, E-cadherin, β-catenin 和 MMP-2 的表达率
• 4 各组移植瘤组织中 HIF-1α 与 MMP-2 表达的关系
• 5 RNA 干扰对HIF-1α, E-cadherin, β-catenin 和MMP-2 的表达影响
• 四 讨论
• 1 RNA 干扰
• 2 HIF-1α与宫颈癌的关系
• 3 MMP-2 与宫颈癌的关系
• 4 HIF-1α，MMP-2 与宫颈癌的关系
• 参考文献
• 五 附图
• 六 实验小结
• 七 综述
• 1 HIF-1
• 2 MMPs
• 3 HIF-1 对MMPs 的作用
• 4 展望
• 参考文献
• 八 论文发表情况
• 九 致谢