论文摘要
中药补骨脂为豆科植物补骨脂（Psoralea corylifolia L.）果实,性温,味辛,具补肾助阳之功效。临床上主治肾虚冷泻,小便频数,阳萎,腰膝冷痛,虚寒喘咳等病症。现代研究表明,补骨脂具有扩张血管,增加心肌收缩力,抗肿瘤,抗菌,雌性激素样作用,治疗白癜风等多重药理活性,到目前为止,国内外研究人员已从补骨脂中分离出香豆素类、黄酮类、萜酚类等化合物四十余种,其中,香豆素类和黄酮类化合物在补骨脂的药理活性研究中发挥着重要作用。目前,从补骨脂中可分离得到的黄酮类化合物主要有异黄酮类、二氢黄酮类及查耳酮类等十余种化合物。经有关研究表明,补骨脂总黄酮不仅具有抗氧化和雌激素样作用,而且还能防止骨吸收、增加骨密度从而对骨质疏松症具有一定的治疗作用。但由于补骨脂总黄酮所含有的黄酮类活性成分过多,从而对每个活性物质的具体药理活性不能进行深入研究,因此我们将补骨脂总黄酮进行分离纯化拟从中得到单一成分,然后再对其药理作用进行研究,从中筛选出活性较强、有临床价值的成分进行研发,为新药的研制奠定基础。第一,首次采用高速逆流色谱仪器（HSCCC）对补骨脂总黄酮进行分离纯化,初步建立分离纯化工艺。在本次试验中,我们通过筛选,以正己烷—乙酸乙酯—甲醇—水为纯化溶剂系统,并按比例1:1:1:1配置,以上相溶液为固定相,下相溶液为流动相,提取温度为25℃,转速为800r/min,通过254nm紫外检测为纯化工艺进行试验,结果收集得6个分离峰,并对其进行初步的理化性质鉴定,初步确定峰4、5物质分别为补骨脂黄酮醇和二氢黄酮类化合物。第二,通过体外成骨细胞试验,以细胞增殖和分化活性为检测指标来检测补骨脂总黄酮、黄酮醇和二氢黄酮类化合物对成骨细胞增殖的影响。结果显示,与空白组比较,补骨脂总黄酮的中剂量组对正常成骨细胞的增殖有一定的影响,且呈显著性差异（0.01＜P＜0.05）,而黄酮醇和二氢黄酮类化合物的作用不明显;但与H2O2所致的细胞氧化损伤模型组相比,补骨脂总黄酮及黄酮醇类化合物的高剂量组对氧化损伤后细胞的增殖及其分化活性均有促进作用,呈显著性差异（0.01＜P＜0.05）。第三,利用细胞氧化及邻苯三酚自氧化的体外氧化模型从补骨脂总黄酮、黄酮醇及二氢黄酮类化合物中筛选出抗氧化活性较强的物质补骨脂黄酮醇类化合物,并对其进行抗氧化机理的研究。（1）采用H2O2所致的成骨细胞氧化模型,通过测定细胞SOD酶的活性探讨了三种成分对成骨细胞的保护和修复作用。结果显示,总黄酮和黄酮醇组的SOD酶活性增强,与模型组比较,差异显著（0.01＜P＜0.05）,表明总黄酮和黄酮醇化合物可预防细胞氧化损伤。（2）采用邻苯三酚自氧化模型考察三种成分的抗氧化活力。试验结果表明,补骨脂黄酮醇和二氢黄酮都具有显著的体外抗氧化活性,且黄酮醇活性强于二氢黄酮,因此,我们筛选出体外抗氧化活性物质为补骨脂黄酮醇。（3）将已筛选出的抗氧化活性物质黄酮醇化合物对氧化损伤的线粒体肿胀度及其内MDA含量的影响,结果显示,该物质可显著降低线粒体肿胀,并对线粒体内MDA的生成有抑制作用,且其作用有量效关系。综上所述,本次试验是首次采用HSCCC对补骨脂总黄酮进行了分离纯化,经初步鉴定出黄酮醇和二氢黄酮类化合物,从而初步建立了纯化条件,为中药成分的分离纯化奠定了基础。并对总黄酮、黄酮醇及二氢黄酮类化合物进行了对成骨细胞的增殖和体外抗氧化作用的研究,结果提示,补骨脂黄酮醇类化合物可促进成骨细胞的增殖,保护线粒体。其机理可能是与其提高细胞SOD酶活性,抑制线粒体脂质过氧化,减少氧自由基对细胞和细胞线粒体的氧化损伤有关,使线粒体维持正常能量代谢,从而维持正常的功能。