枇杷叶质量评价的研究

论文摘要

枇杷叶收载于历版《中国药典》中,为蔷薇科植物枇杷Eriobotrya japonica (Thunb.)Lindl.的干燥叶,为传统中药,性微寒,味苦辛,归肺、胃经,具有清肺止咳,降逆止呕等功效。药理研究表明枇杷叶具有较好的抗炎和止咳作用,近年研究还发现,枇杷叶有抗肿瘤、抗病毒、降血糖、保肝利胆、清除氧自由基、增强机体免疫功能等作用。我国枇杷叶资源丰富,主要分布于中南地区及陕西、甘肃、江苏、安徽、浙江、江西、广东、福建、台湾、四川、贵州、云南等地。栽培面积达11.28万hm2,占世界枇杷叶产量的50%以上。枇杷叶全年皆可采收,但有关枇杷叶的采收季节没有严格标准。枇杷叶中的有效成分主要是黄酮类和三萜酸类。枇杷叶中黄酮类化合物是以槲皮素和山奈酚为母核的一系列化合物,种类多、含量低。本研究将枇杷叶中黄酮类化合物进行水解,以槲皮素、山柰酚为对照品测定一系列黄酮类化合物的含量,建立了枇杷叶中黄酮类化合物的含量测定方法,并对不同采收季及不同产地枇杷叶中的总黄酮及槲皮素、山奈酚含量进行了比较研究。本试验测定水解后槲皮素与山奈酚的含量并计算总黄酮含量,不同月份枇杷叶的总黄酮含量差别较大,其中4、5月份样品含量较高,7、9、10月份样品含量亦较高,3月份的含量最低。枇杷叶花期在9～11月,果期在翌年4～5月,而枇杷叶中总黄酮的含量在4、5月及9、10月都较高,而3、6、11月含量比较低,说明黄酮类化学成分与花期、果期可能存在一定的相关性,其关系如何,有待进一步研究。不同产地的枇杷叶药材,槲皮素和山奈酚的含量差异较大,可能受生长环境、生长时间、采摘时间等因素的影响。本实验取四个批次的枇杷叶样品,按药典标准炮制,测其炮制前后含量变化,炮制后,枇杷叶中槲皮素、山奈酚及总黄酮的量减少了很多,其中槲皮素的含量下降比例最大,可能是炮制后黄酮类化学结构发生变化导致了含量的降低,本实验首次建立同时测定枇杷叶药材中槲皮素和山奈酚含量的方法,具有准确可靠、重复性好、特征性强、方法简便等特点。近年来,大量的研究发现枇杷叶中的熊果酸和齐墩果酸除了具有抗炎、保肝、止痛等药理作用外,还具有显著的抗肿瘤和促进免疫作用,使其应用范围也明显扩大。关于枇杷叶的质量控制标准,《中国药典》(2010年版,一部)以齐墩果酸和熊果酸为含量测定指标控制其质量。本实验收集不同季节的及不同产地的枇杷叶,考察齐墩果酸及熊果酸含量的变化,实验结果显示枇杷叶中齐墩果酸和熊果酸的含量随季节变化而不同,其中熊果酸的含量在一年当中变化较小,两份不同产地的齐墩果酸和熊果酸含量变化趋势不是很一致,这可能于枇杷叶产地的生长环境有关。不同产地的枇杷叶的齐墩果酸和熊果酸含量存在一定的差别,不是很大,炮制后齐墩果酸和熊果酸的含量都有所下降,但不是很显著。本课题选择枇杷叶,拟分别采用水和乙醇为溶媒提取获得其水提物和醇提物,以及黄酮部位及三萜部位。进行各提取物止咳化痰平喘作用的比较研究,对于枇杷叶止咳化痰平喘的总体功效,其水提工艺略优于醇提工艺,经蜜炙炮制后效果亦略优于生品,即炙枇杷叶水提物止咳化痰平喘功效最佳。不同枇杷叶提取物均有明显的平喘作用,而枇杷叶水提物平喘功效略优于其醇提物。与空白组比较,三萜部位及黄酮部位也具有一定的止咳平喘作用。枇杷叶炮制后齐墩果酸和熊果酸的含量有所下降,而黄酮类化合物含量下降了一半左右,但是药理实验显示炙枇杷叶的止咳化痰平喘方面的疗效比生枇杷叶更好,说明枇杷叶中除了三萜类和黄酮类化合物有止咳化痰平喘的疗效外,还有其它的化合物起作用,有待进一步研究。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 枇杷叶化学成分研究
• 1.1.1 三萜类
• 1.1.2 黄酮类
• 1.1.3 倍半萜类
• 1.1.4 多酚类
• 1.1.5 糖苷类
• 1.1.6 挥发油
• 1.2 枇杷叶的质量控制研究
• 1.2.1 含量测定及控制指标的建立
• 1.2.2 指纹图谱的建立
• 1.3 枇杷叶药理研究
• 1.3.1 抗炎止咳作用
• 1.3.2 降血糖作用
• 1.3.3 抗癌作用
• 1.3.4 抗病毒作用
• 1.3.5 保肝作用
• 1.3.6 抗氧化作用
• 第二章 黄酮类成分的含量测定
• 2.1 仪器与试药
• 2.2 方法与结果
• 2.2.1 检测波长的选择
• 2.2.2 流动相的选择
• 2.2.3 色谱条件与系统适应性试验
• 2.2.4 对照品溶液的制备
• 2.2.5 供试品溶液的制备
• 2.2.6 线性关系考察
• 2.2.7 精密度试验
• 2.2.8 稳定性试验
• 2.2.9 重复性试验
• 2.2.10 加样回收试验
• 2.2.11 样品测定
• 2.3 讨论
• 第三章 齐墩果酸和熊果酸的含量测定
• 3.1 仪器与试药
• 3.2 方法与结果
• 3.2.1 色谱条件与系统适用性试验
• 3.2.2 对照品溶液的制备
• 3.2.3 供试品溶液的制备
• 3.2.4 样品测定
• 3.3 讨论
• 第四章 止咳化痰平喘药理实验
• 4.1 材料与仪器
• 4.1.1 受试药的制备
• 4.1.1.1 生枇杷叶的提取
• 4.1.1.2 炙枇杷叶的提取
• 4.1.1.3 三萜部位和黄酮部位的提取
• 4.1.2 试剂
• 4.1.3 仪器
• 4.1.4 动物
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 氨水诱发小鼠咳嗽实验
• 4.2.2 小鼠呼吸道酚红冲洗法的祛痰实验
• 4.2.2.1 酚红标准曲线制作
• 4.2.2.2 药效学实验
• 4.2.3 组胺-乙酰胆碱诱发的豚鼠哮喘实验
• 4.3 结果
• 4.3.1 枇杷叶不同提取物对小鼠咳嗽的影响
• 4.3.2 枇杷叶不同提取物对小鼠呼吸道酚红排泌量的影响
• 4.3.2.1 酚红标准曲线
• 4.3.2.2 药物对小鼠呼吸道酚红排泌量的影响
• 4.3.3 枇杷叶不同提取物对豚鼠哮喘的影响
• 第五章 结果与讨论
• 5.1 枇杷叶中黄酮类和三萜类化学成分分析
• 5.2 炮制、提取工艺对药理作用的影响
• 5.3 针对止咳化痰平喘疗效的综合讨论
• 5.4 针对黄酮部位和三萜部位的作用及止咳化痰平喘疗效的综合讨论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表文章情况
• 致谢