论文摘要
目的组蛋白去乙酰化酶11(Histone deacetylase 11, HDAC11)与细胞分裂周期,神经系统发育,肿瘤的发生以及免疫功能调节等有着紧密联系。最新研究表明,抑制单核巨噬细胞RAW264.7中HDAC11活性可促进该细胞内源性白介素10(interleukin 10, IL-10)的表达,从而诱导免疫耐受的产生。本实验旨在通过观察抑制脂多糖处理的Kupffer细胞(KCs)中HDAC11活性对其内源性IL-10的表达和细胞表面抗原递呈相关分子表达的影响,探讨抑制HDAC11诱导KCs免疫耐受产生的机制。方法将BALB/c小鼠KCs经密度梯度离心法分离,贴壁细胞用含20%胎牛血清(FCS)的RPMI1640培养液培养24h后随机分为三组:(1)空白对照组(空白组,继续以RPMI1640培养20h),(2)阴性对照组(阴性组,转染空白质粒control vector),(3)质粒组(转染HDAC11短发卡RNA质粒(HDAC11-shRNA)),三组均给予脂多糖。3h后,以Real time-PCR和Western-blot法检测各组KCs中HDAC11和IL-10基因及蛋白表达;流式细胞仪检测KCs表面分子MHC-II, B7-1, B7-2和CD40表达;将可识别卵清蛋白(ovalbumin, OVA)的转基因小鼠脾T细胞与上述三组KCs共培养,3d后3H-TdR标记法检测T细胞增殖情况;以酶联免疫吸附法(ELISA)检测共培养上清液中IL-2含量。结果(1)Real-time PCR结果:以HDAC11及IL-10的2-ΔCt值作为其表达量,以此值与GAPDH比值的X±S代表其基因相对表达水平。HDAC11在质粒组表达最低,为0.076±0.007,与两对照组相比(空白组0.145±0.012,阴性组0.141±0.013),差异具有统计学意义(P<0.05);而IL-10在质粒组表达最高,为0.084±0.006,与两对照组相比(空白组0.051±0.004,阴性组0.052±0.004),差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)Western-blot结果:以HDAC11及IL-10条带与GAPDH灰度值比值的X±S代表其蛋白相对表达水平。与Real-time PCR结果相似,HDAC11在质粒组表达最低,为0.132±0.012,与两对照组相比(空白组0.373±0.023,阴性组0.365±0.019),差异具有统计学意义(P<0.05);而IL-10在质粒表达最高,为0.218±0.018,与两对照组相比(空白组0.096±0.009,阴性组0.101±0.011),差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)流式细胞仪检测结果:质粒组KC表面抗原递呈相关分子表达低于空白对照组和阴性对照组。(4)共培养T细胞增殖结果:质粒组CPM值最低,为2163±146,与两对照组相比(空白组3654±165,阴性组3509±142),差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)ELISA结果:质粒组共培养上清液中IL-2含量最低,为463.7±38.9 pg/mL,与两对照组相比(空白组879.2±65.5 pg/mL,阴性组854.4±67.3 pg/mL),差异具有统计学意义(P<0.05)。上述数据中,两对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验证明,抑制KCs内HDAC11表达可促进其内源性IL-10的过量表达,从而进一步抑制KCs抗原递呈能力和共培养的T细胞增殖活化,诱导免疫耐受的产生。因此,HDAC11可能在肝脏这一免疫特惠器官中发挥重要作用,为后期应用HDAC11治疗晚期肝病内毒素血症及诱导肝移植后免疫耐受的动物实验和临床应用提供了良好的前期细胞试验基础。
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相关论文文献
- [1].马氏珠母贝组蛋白去乙酰化酶HDAC11基因的克隆与表达分析[J]. 基因组学与应用生物学 2019(11)
- [2].HDAC11调节垂体瘤中细胞凋亡的作用机制研究[J]. 立体定向和功能性神经外科杂志 2020(04)
- [3].组蛋白去乙酰化酶在间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化过程中的表达及HDAC11的作用[J]. 中国生物化学与分子生物学报 2015(12)
- [4].组蛋白去乙酰化酶11的免疫调节机制研究进展[J]. 免疫学杂志 2014(10)
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